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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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 카테고리: 전체 > Cell Biology > Cell Culture
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Q. cell culture에 HEPES가 꼭 필요한가요?
세포은행에서 세포를 분양받아 키우고 있습니다. 세포은행의 culture method에는 HEPES가 포함되어있던데 제가 사용하는 배지에는 HEPES가 없습니다. 찾아보니 HEPES가 있으면 CO2 incubator가 아니어도 키울 수 있는 것 같더라구요 저는 CO2 incubator에서 키우고 있습니다. 그러면 HEPES가 세포가 자라는데에 큰 문제는 없나요? 혹시 필요하다면 배지에 따로 첨가해서 사용하면 될까요?   그리고 세포은행의 Saos2 세포가 검색하면 두 가지가 나옵니다. 그런데 이름은 똑같습니다. origin의 차이가 조금 있나 싶은데 우선 culture method가 다릅니다. 혹시 이 두 세포가 어떻게 다른지 아시나요..?
회원작성글 차몬드  |  09.24
Q. HaCaT cell을 분양 요청
안녕하세요 최근 피부 관련 실험을 하면서 HaCaT cell을 구매 하려하는데 국내에서는 구매 할 수가 없어서요  혹시 HaCaT cell을 가지고 계시면 분양 가능할까요? kibumsy@gmail.com으로 회신 부탁드립니다.  감사합니다.!!
회원작성글 비타민큐  |  09.23
Q. dg18배지 콜로니카운트 관련 질문있습니다 첨부파일
여기서 검은색이 있는 13개정도가 콜로니이고 나머지는 기포인건가요?
회원작성글 메로나99  |  09.23
Q. 35π에 seeding할 cell 수 계산이 가능한가요?
평소에는 35π dish, 2~2.5 x 10^5 seeding → O/N incubation(1일) → transfection 의 순서로 실험을 진행하였습니다.   그런데 이번에는 1일 O/N으로 incubation하던 것을 2일 동안 incubation하여 실험을 진행하고자 하는데요. transfection할 때 dish에 깔린 cell 수를 비슷하게 하려면 2일 incubation할 때는 처음 seeding을 얼마나 해야할지 고민이라 질문드립니다...   경험에서 비롯된 조언이나 cell 분열 속도를 가지고 역으로 seeding할 cell 수를 계산할 수 있는지 궁금합니다! cell은 bovine aortic endothelial cell(BAEC)을 사용하였습니다.
회원작성글 가우미  |  09.23
Q. C2C12 cell culture 분화 유도 확인 (사진) 첨부파일
c2c12 cell 양만 불리면서 유지하려고 키우는 중인데, high density로 키운 것 같아서 분화가 유도 된 건지 확인해봐야 할 것 같은데, 눈으로는 크게 잘 모르겠습니다.. 아래 사진 첨부하겠습니다 density (confluence) 별로 다양하게 찍어봤습니다
회원작성글 mintim99  |  09.23
Q. Raw264.7 물질처리 9시간 후 이상반응 문의 첨부파일
안녕하세요. Raw264.7 세포를 이용하여 생존율 확인하는 중  0.1ug/ml 농도로 물질처리 9시간 후 세포의 형태가 이상하여 질문드립니다. 48well plate 에 5x10^4 로 계산하여 seeding 하였고, 0.1, 1, 10 ug/ml 농도별 3반복씩 물질처리 하였습니다. 9시간 후 현미경 관찰 시 0.1ug/ml 농도 처리 3반복 well만 첨부한 사진처럼 변했습니다. 똑같은 plate가 하나 더 있었는데 그 plate 상 0.1ug/ml well은 멀쩡했구요.. 사진의 핵?막?같은건 뭐라고 판단하시나요.. 오염된걸까요..?    
회원작성글 펩시라임  |  09.22
Q. C2C12 cell culture confluency
안녕하세요. C2C12 cell을 저번주 금요일에 thawing down 해서 이틀 후에 확인하여 90% 정도 confluency가 찼을 때 split을 하고(vial은 안 만듦) 다시 이틀 후에 15cm dish로 subculture를 했는데 그 때는 처음보다 confluency가 더 많이 차 있었습니다.  제가 이 세포의 doubling time을 착각해서 confluency 가 너무 많이 찼을 때 계대를 했는데, 이미 분화가 시작 되어서 이 세포로 실험을 진행하지 못할까요..? 그동안 만들어둔 vial도 이제 분화 및 추출처리 실험에 사용하지 못하는 건가요?ㅠㅠ 그리고 differentiation 유도가 된지 안된지 잘 모르겠는데, 단순히 morphology 만 보고 알 수 있는건가요? 귀한 세포인데 큰 실수를 한것같아서 너무 조마조마합니다. c2c12 cell에 관한 자세한 조언 등등 부탁드립니다. 감사합니다.
회원작성글 mintim99  |  09.22
Q. antibiotics selection 시 media
G418 항생제를 통해 selection test를 해보려고 합니다. media에 G418을 농도에 맞게 넣은뒤 cell에 처리한다고 하는데 이때 ampicillin이 없는 FBS만 포함된 media를 사용해야하나요?? 아니면 ampicillin이 포함되어 있어도 상관없나요??
회원작성글 빙글뱅글  |  09.22
Q. iPSC 배양용 Essential 8 배지 써보신분
fibroblast로 episomal reporgramming 해서 ips를 만드려고 하는 중인데요.   episomal reprogramming kit를 이용하는데 여기 protocol에 essential 8 media를 쓸때는 37도에서 데우지 말고 상온에 둬서 찬기가 없어질때까지 두라는데 이렇게 사용하는게 맞는건가요?   "Before use, warm complete medium required for that day at room temperature until it is no longer cool to the touch. Do not warm the medium at 37°C."   주말에도 나와서 배지교환해줘야 하는데 37도에서 데우기 없이 상온에서 두려면 시간이 꽤 걸릴것 같아서요ㅜㅜ   essential 8 배지 사용해보신분 계시면 이렇게 사용하셨는지 37도에서 데워도 상관없는지 궁금합니다.
회원작성글 him  |  09.22
Q. 이거 컨탐일까요..? 첨부파일
안녕하세요 a549 mtt를 하고 있는 학부생입니다. 셀 시딩할때 2well에 버블이 생겨서 별 생각 없이(ㅠㅠ) 석션하고 다시 배지를 깔았어요.. 항생제 처리 할때까지는 셀이 안 자라기만 했었는데 오늘 MTT처리하려고 보니까 이상한게 생겨서.. 이게 컨탐일까요? 아니면 뭘까요..
회원작성글 으뚠이  |  09.22
Q. 세포 normalize 방법 (2)
이전 글에 추가 질문입니다.. A와 B라는 세포는 종류가 다릅니다 citrate synthase assay kit을 이용해 비교하려고 하는데 세포 5,000 개 당 citrate를 얼마나 생성했는지 확인하려고 합니다. 여기서 A와 B의 갯수가 동일하다는 normalize가 고민입니다. WST 시약으로 하기엔, A와 B의 mitochondrial dyhydrogenase가 동일하다고 보기 어려운데.. 좋은 방법 있을까요?   세포 5,000 을 counting은 설득력이 떨어지는 것 같아서..
회원작성글 모자  |  09.21
Q. raw264.7 cell 이 LPS 로 ROS 자극이 안돼요
RAW셀에 LPS 1ug/ml 로 자극해서 ROS 생성을 보려고 합니다. 근데 도통 ROS 생성이 늘어나질 않네요. 오히려 N군보다 줄어들어요. 대학원에선 1ug/ml LPS 로도 충분히 자극이 됐는데 여기선 몇번째 반복인지 답답하네요.  NO 생성이나 TNF-a 생성 같은건 LPS 로 자극 되는거 다 확인 했습니다. 유독 ROS 만 그래요
회원작성글 AGCT  |  09.20
Q. mycoplasma test 결과 분석좀 도와주세요!
사용한 제품은 takara mycoplasma test kit 입니다. 1차 PCR 결과,  3번 lane : control (DMEM), 4번~6번 lane은 배양액 sample입니다.   1차 PCR에서 control template가 primer에 의해 잘 증폭된것(810 bp)을 확인하였고 sample에서는 mycoplasma band가 뜨지 안은것을 확인하였습니다.   2차 PCR 결과  2차 PCR에서는 1차 PCR에서 증폭된 산물의 더 작은 부분을 증폭하는 것으로 control template 1차산물에서 증폭된 2차 증폭산물(590 bp)을 확인할 수 있었는데, sample에서도 590 bp 부근에서 밴드가 뜨는데 이게 왜 뜨는지를 모르겠습니다..   control template에는 mycoplasma 서열이 들어있지 않다고 나와있는데 저 밴드를 뭐라고 봐야할까요? 
회원작성글 ungo  |  09.20
Q. 세포 normalize를 어떻게 할까요
A와 B 세포가 있습니다. 서로 세포의 종류가 달라요 (A: 신경, B:면역). 크기도 다릅니다. metabolite를 비교하려고 세포 5,000개 당 glucose oxidase를 측정하려는데, A와 B의 갯수가 동일하다는 normalize를 어떻게 할 지 고민됩니다. WST 같은 시약을 사용하기엔, A와 B의 mitochondria 탈수소효소가 동일할 거란 보장도 없는데.. counting으로만 제시하기엔 아쉽습니다. 좋은 방법 있을까요?  
회원작성글 모자  |  09.19
Q. Caco-2 cell 배양 관련 첨부파일
한국세포주은행에서 caco-2 cell을 분양받아, MEM, FBS 10% NEAA 1% penicillin streptomycin 1% 로 계대배양 하였습니다.   계대한지 이틀정도 지났는데도 부착되지 않은 세포들이 반 가까이 되는것 같습니다. 세포주은행에서 분양받은 것을 관찰한 것과 계대 후 관찰한 것의 세포 모양 크기가 너무 많이 나서, 걱정되는 마음에 글 작성하였습니다. 확인 부탁드립니다...
회원작성글 doxxx  |  09.19
Q. OD가 낮다는 것을 어떻게 해석해야될까요
세포를 키우면서 중간중간 OD로 growth curve를 확인하는데요 curve는 당연히 exponential에서 급격히 올라가고 stationary 에서는 평평한 모습으로 다 비슷하게 나오지만 그 정도가 다 다르게 나오게 되는데요 (약물 처리를 다르게 했기 때문) 예를 들어서 같은 시기에 OD를 측정해보면 A 약물을 처리했을 경우 B 약물을 처리했을 경우보다 A의 OD가 B보다 높게 나옵니다. 이럴 경우에는 B의 growth가 억제된다고 생각하면 되는건가요?? 저걸 측정했을 시기는 stationary phase의 시점이고요  OD가 같은 측정시기에 다른거에 비해서 낮게 나온다는 것을 어떻게 해석하는것이 정확한지가 궁금합니다. 단지, 세포의 생장이 느린것으로 봐야되는 것일지 아니면  그만큼 많은 세포가 죽어있다고 봐야될지
회원작성글 브르르르릭  |  09.18
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