안녕하세요 저는 대학원 석사 2학년 과정 중인 학생입니다.  제가 HCT-116 cell을 24 well plate에 50x10^4cells/ml로 깔아주었는데 다음날 확인해보니  사진과 같은 이상한 게 현미경에서 관찰되었습니다.  혹시 이게 뭘까요..?ㅠㅠ

Bacillus coagulans 포자 발아 조건 및 실험 방법 아시는분 있다요 … 도와주세요 ㅠㅠㅠㅠㅠ

hPDL(human periodontal Ligament Stem Cell)을 가지고 실험중인  불쌍한 석사생입니다.. 몇달째 Transfection 실험을 해왔고 웨스턴으로 FLAG-tag을 잡는 실험을 했는데 성공하지 못했습니다.  제품은 Invitrogene Lipofectamine 2000을 계속 사용해왔습니다.  Trouble shooting 을 다양하게 해봤습니다. 먼저 lipo, cDNA 비율도 계속 바꿨고, 회사의 프로토콜에 따라 진행했고 브릭을 참고해서 다양하게 시도도 해봤습니다..  우선 FLAG항체나, 웨스턴 할때 필요한 material엔 문제가 없습니다.  결론적으로는 Lipofectamine 2000이 아닌 3000제품을 쓰면 성공할지가 궁금해서 그런 경험이 있는 선생님들이나 어떻게 해야할지 아시는 선생님이 있으면 부탁드립니다.... 살려주세요.............  

현재 pUE (pig uterine cell) cell을 배양하고 있습니다. 많은 cell들이 passage를 최대 30이하까지만 계대배양을 한다고 알고 있습니다. 근데 저희 실험실에는  pUE cell의 passage가 30이상인 것들만 있어서 의문입니다.  검색을 하여도 pUE cell에 대한 정보를 많이 찾지 못하여서 질문드립니다. pUE cell의 최대 passage를 아시는 분은 알려주세요ㅜㅜ 

최근 breast cancer cell 을 이용하여 실험을 진행중인 대학원생입니다. 실험을 하다가 문득 궁금해진 부분이 있어서 질문을 남기게 되었습니다..! 현재 4T1 cell을 키우고 있는 중인데, 찾아보니 MTV/TM-011 라는 세포도 mouse breast cancer cell 인 것을 알게되었습니다. 그런데 논문에 사용되는 세포는 4T1이 훨씬 많다고 느껴져서요 4T1과 MTV/TM-011, 이 두가지 세포라인을 구분해야하는 이유가 있을까요???? 너무 궁금해서 찾아보긴했는데 시원하게 답이 안내려집니다ㅜㅜ 큰 문제가 없다면 세포주은행을 통해서 구매를 해보고싶은데 (4T1은 ATCC에서만 판매 중인 것으로 알고있습니다..... 혹시 국내에서는 판매하는 곳 없겠죠...???) 혹시라도 아시는 분은 답변해주시면 감사하겠습니다. 모르시더라도 이러한 이유때문은 아닐지 디스커션해주신다면 감사하겠습니다!!! 

안녕하세요. 세포주를 이용한 기능성평가 실험 중 문제가 생겨 문의드립니다. 시험물질 처리 시 최종 농도에서 pH가 11까지 올라가는 경우 pH를 7.4 수준으로 맞춰줄 수 있는 방법이 있을까요?? 버퍼를 사용하여 stock을 만들면 어느정도 완충이 될까하여 물질을 PBS에 녹여서 처리해보기도 하고, 세포배양배지에 바로 녹여서 처리해봐도 pH가 너무 높아요..  이 경우 HCL을 이용하여 적정을 해야할까요? 좋은 아이디어나 경험이 있으시면 조언 부탁드립니다.

NK cell 연구 하는 사람입니다.  PBMC 작업에 필요한 Ficoll 을 계속 해외 직구로 구매해서 사용 하고 있었는데, 최근들어 배송 기간이 한달 가까이 늘어나고 있어서요.  100ml 이상 대용량 에 재고 가지고 있는 국내 업체 소개해주실 선생님 계시나 해서 글 남겨 봅니다. 혹, 관련 업체 내용을 올리는 것이 게시판 룰에 어긋나는 행위이면 withusgroup1@gmail.com  으로 업체 소개 부탁드립니다. 감사합니다.  

안녕하세요. Contamination 여부 확인 목적으로 DAPI staining을 처음 해 본 학부생입니다. 오늘 확인 결과 staining이 안 돼서 안 보이던데 어떤 문제였을까요..? Protocol은 다음과 같습니다. 1. Media suction 2. PBS 1 ml로 wash 후 suction 3. 4% PFA 1 ml로 fixation 4. 상온에서 15분 대기 후 PFA suction 5. PBS 1 ml로 wash 후 suction 6. DAPI solution 두 방울 넣은 후 slide plate에 glass를 둠 7. 호일로 감싼 후 10분 대기 8. 물기 제거 후 detection   감사합니다.

2D와 3D cell에서 추출한 엑소좀을 비교하는데 같은양의 cell을 seeding해도 3D에서 스페로이드를 형성못한 cell들이 있기 때문에 세포수는 차이가 있는것이 아닌가요? 논문을 보면 셀카운트하는것을 볼 수 가 없어서 이렇게 질문드려봅니다.

안녕하세요 현재 ROS activity, Apoptosis rate에서 Apoptotic cell 증가 확인 후 Cell cycle analysis 진행중인 대학원생입니다...   논문에서 나온 프로토콜로 진행중인데 도저히 G0/G1 phase, S phase, G2/M phase 층 생기는게 관찰되지 않습니다. 이렇게 찍혀버리는데 왜 층이 안생기는지 모르겠어요...   프로토콜은 다음과 같습니다. 1. 6well plate에 well당 10만 seeding 2. chemical 처리 후 24hr treatment. 3. Media, DPBS washing buffer, Trypsin-EDTA 후 Media 추가한 용액까지 전부 모음. 4. 상층액 제거 후 DPBS resuspension, 300g로 5분 centrifugation 후 상층액 suction. 5. 상층액 suction 후 각 PBS 500ul로 resuspension 6. chilled 70% ethanol in DW로 4.5ml 약하게 vortexing 하면서 첨가 7. 4도 냉장고에 30분 이상 incubation (or more) 8. incubation 후 300g로 5분 centrifugation. 9. 상층액 suction 후 PBS 5ml로 resuspension 10. 300g로 5분 centrifugation. 11. 상층액 제거 후 PI staining solution (0.1% Triton X-100, 100ug/ml RNaseA, 15ug/ml PI in PBS) 각 Sample당 1ml로 resuspension후 37도에서 10분 암조건으로 incubation 12. FACS 측정.   여기서 혹시 제가 어떤 문제가 있을까요...? 프로토콜 논문을 2개를 찾아보면서 이것저것 1달을 해봤는데 도저히 층이 생기지 않아서 여쭤봅니다..... 살려주세요.... cell cycle했던 사람들이 다 졸업하거나 사라져서 물어볼 사람이 없어요,,,

exosome을 isolation을 하는 방법 중에 알고 있는 방법이 sucrose gradient를 통해 획득하는 방법과, TFF(Tangential flow filtration system)을 통해서 exosome을 얻어내는 방법이 있다는 것을 알게 되었는데 TFF의 경우에는 capsule을 통해서 soluble protein과 antibiotics를 제거할 수 있다고 명시 되어 있는데, sucrose gradient 방법을 통해서는 이러한 제거가 가능한지에 대해서 궁금합니다. 그리고 혹시 exosome을 얻어내는 다른 방법도 존재하나요? <JOURNAL OF EXTRACELLULAR VESICLES 2020, VOL. 9, 1735249 https://doi.org/10.1080/20013078.2020.1735249>

미생물 초보 자입니다. Geobacillus stearothermophilus를 액체 배양 후 원심분리를 통해  그림과 같은 pellet을 얻었습니다. 사진에서 보듯이  pellet은 두 부분으로 나타나는데요.. 어느 부분이 Geobacillus stearothermophilus 인가요? 아랫 부분 작게 뭉쳐진 부분인가요? 윗 부분의 좀 크게 형성 된 부분인가요?

  안녕하세요, 박사과정생으로 이번에 Dendritic cell에 대해 연구를 하게 되었습니다. 기존에 Bone marrow cell을 마우스의 정강이뼈와 대퇴부에서 isolation하여 GM-CSF를 treat하여 BMDM을 만들어 사용하는 실험은 몇번 해보아서 알고 있었고, GM-CSF를 이용한 BMDC 생성법도 알고 있었는데요,   이번에 https://doi.org/10.1016/j.immuni.2020.04.005 라는 논문에서 보게된 Flt3L을 이용한 BM culture방법을 사용하여 DC를 만들고 싶어, article에 있는 methods를 그대로 따라서 해 보았는데.. 완전히 실패하였습니다.   위 논문에 쓰인 protocol을 간단히 설명드리면, BM뽑아서 RPMI (10%FBS, 2mM L-glutamine, b-mercapto, Flt3L)에 3일간 culture후 3일째에 OP9 cell과 합쳐 co-culture하라고 되어 있는데요, 문제는 OP9 cell과 합치기도 전인 3일째에 cell들을 harvest하여 FACs로 확인해보니 대부분의 BMcell이 죽었다는 것입니다. BM cell의 survival에 도움을 주는 GM-CSF가 전혀 들어가지 않아서 그런것인가 추측만 할뿐인데, 논문 저자들은 어떻게 실험을 했는지 알수가 없어서...  1저자 2저자 연락처를 찾아보려고 노력도 했는데 도저히 연락할 방법이 없더군요. 3일째에 그래도 얼마 안되는 cell이라도 살아있으니까 OP9 cell과 합쳐 보았는데, 오늘 5일째 FACs를 확인해보니 조금 살아있는 cell이 늘긴 했습니다만 이 역시 너무 적습니다. 이렇게 되는게 정상인것 같지도 않고요... 혹시 이 실험방법과 관련하여 경험이 있으시거나 지식이 있으신 분이 계시다면 조언을 해주시면 정말 감사하겠습니다.   긴 글 읽어주셔서 감사합니다. 좋은하루 되세요.

안녕하세요 Starflower입니다. MBMEC cell을 이용하여 특정 약물을 처리하는 그룹과 대조군의 cell viability와 proliferation을 확인하는 실험을 디자인하려 하는데, 이 특정 약물을 사용했을 때 cell viability가 좋아지는 경우에도 CCK-8 assay를 사용해도 될까요?   이전에 다른 세포지만 CCK-8을 이용해서 IC50값을 구하고 그런 실험은 한 적 있는데 반대적인 상황이라서 질문 드립니다.   혹시 좋은 방법이 아니라면 또 다른 실험방법이 있을까요? 감사합니다.

cell culture할 때 media에 sodium bicarbonate가 있어서 CO2 incubator속에서 pH를 조절해주는데 이 때 중추적인 역할을 하는 건 bicarbonate로 알고있습니다. 그런데 그냥 bicarbonate를 쓰지 않고 sodium bicarbonate를 넣어주는 이유가 있나요? sodium이 어떤 역할을 하는 건지 궁금합니다.

안녕하세요.  이번에 HepG2에 lipid accumulation을 하여서 oil red o staining을 하려고하는데 lipid를 Chemically defined Lipid Concentrate를 사용하여도 accumulation이 되나요??? 다른 논문을 찾아봤을때는 oleic acid나 palmitic acid를 2:1로 사용한다는데 이걸 사용해도 되는지 궁금해서 질문 남깁니다 감사힙니다.