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[우당탕탕 석사 적응기] 석사 1학기 - 새로운 환경, 그리고 후회
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 카테고리: 전체 > Cell Biology
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Q. Qrt PCR시 처리시간 설정할 때
물론 cell과 drug마다 다른 것은 알지만, 일반적으로 1h와 3h의 차이가 유의미하다고 보아도 될지 궁금합니다. Ht29 colon cancer cell에 H2O2를 처리하여 oxidative stress 관련 인자들을 보고자 하는데, 해당 cell에 h2o2를 처리하여 해당 cytokine을 western을 통해 본 실험은 있으나 mrna level에서 본 논문은 찾지 못했습니다 논문 참고 시, 타 cell에 h2o2 처리 시엔 1h 혹은 24h 뒤 확인하였고, 저와 같은 cell에 다른 물질을 처리하였을 땐 해당 인자를 12~48h에 보더라구요 1,2 fold 수준이라 실험 상 오차일 수도 있겠으나, 3h 및 24h에서 확인하였을 때는 유의미한 결과가 없었습니다 마지막으로 조건을 달리해서 보고 싶은데, 1h에서 확인하는 것은 무의미할까요..? 12 혹은 48h에서 처리하는 것이 맞을지.. 고민이 됩니다 도움 부탁드려요
회원작성글 Jdjdidde  |  09.25
Q. Autophagy는 질병에 있어서 좋은건가요 나쁜건가요?
안녕하세요 너무 기초적인 질문일수도 있기는 한데 실험을 하다가 헷갈려서 질문드립니다 ㅠ 저는 어떤 toxic한 물질을 처리하고 치료제를 주었을 때 autophagy가 증가함으로써 toxic 물질이 감소하고 치료효과를 보인다 라는 가설을 가지고 실험을 하고 있습니다 그런데 어떤 논문에서는 질병에서 autophagy가 증가하는 양상을 보이므로 치료제를 써서 autophagy를 억제시킨다 라고 이야기를 하더라구요 그래서 이autophagy를 어떻게 해석해야 하는지 궁금합니다 .. 저는 실험에서 autophagy 마커로 lc3를 보구요 치료제에 의해 Toxic 물질이 감소한 것을 western으로 확인한 후 lc3를 보았을 때 증가할 것이라는 예상결과를 가지고 실험하고 있습니다 . 다른 논문을 공부하다가 거기서는 또 lc3가 감소한게 좋은 것이라고 하길래 이해가 안가서 질문 드립니다 .... 답변 부탁드립니다
회원작성글 2밍  |  09.25
Q. cell culture에 HEPES가 꼭 필요한가요?
세포은행에서 세포를 분양받아 키우고 있습니다. 세포은행의 culture method에는 HEPES가 포함되어있던데 제가 사용하는 배지에는 HEPES가 없습니다. 찾아보니 HEPES가 있으면 CO2 incubator가 아니어도 키울 수 있는 것 같더라구요 저는 CO2 incubator에서 키우고 있습니다. 그러면 HEPES가 세포가 자라는데에 큰 문제는 없나요? 혹시 필요하다면 배지에 따로 첨가해서 사용하면 될까요?   그리고 세포은행의 Saos2 세포가 검색하면 두 가지가 나옵니다. 그런데 이름은 똑같습니다. origin의 차이가 조금 있나 싶은데 우선 culture method가 다릅니다. 혹시 이 두 세포가 어떻게 다른지 아시나요..?
회원작성글 차몬드  |  09.24
Q. HaCaT cell을 분양 요청
안녕하세요 최근 피부 관련 실험을 하면서 HaCaT cell을 구매 하려하는데 국내에서는 구매 할 수가 없어서요  혹시 HaCaT cell을 가지고 계시면 분양 가능할까요? kibumsy@gmail.com으로 회신 부탁드립니다.  감사합니다.!!
회원작성글 비타민큐  |  09.23
Q. dg18배지 콜로니카운트 관련 질문있습니다 첨부파일
여기서 검은색이 있는 13개정도가 콜로니이고 나머지는 기포인건가요?
회원작성글 메로나99  |  09.23
Q. 35π에 seeding할 cell 수 계산이 가능한가요?
평소에는 35π dish, 2~2.5 x 10^5 seeding → O/N incubation(1일) → transfection 의 순서로 실험을 진행하였습니다.   그런데 이번에는 1일 O/N으로 incubation하던 것을 2일 동안 incubation하여 실험을 진행하고자 하는데요. transfection할 때 dish에 깔린 cell 수를 비슷하게 하려면 2일 incubation할 때는 처음 seeding을 얼마나 해야할지 고민이라 질문드립니다...   경험에서 비롯된 조언이나 cell 분열 속도를 가지고 역으로 seeding할 cell 수를 계산할 수 있는지 궁금합니다! cell은 bovine aortic endothelial cell(BAEC)을 사용하였습니다.
회원작성글 가우미  |  09.23
Q. C2C12 cell culture 분화 유도 확인 (사진) 첨부파일
c2c12 cell 양만 불리면서 유지하려고 키우는 중인데, high density로 키운 것 같아서 분화가 유도 된 건지 확인해봐야 할 것 같은데, 눈으로는 크게 잘 모르겠습니다.. 아래 사진 첨부하겠습니다 density (confluence) 별로 다양하게 찍어봤습니다
회원작성글 mintim99  |  09.23
Q. lipid peroxidation assay kit 관련 질문입니다.
abbexa사의 lipid peroxidation(MDA) assay kit을 구매했고 이걸 이용해서 lipid peroxidation를 측정하려고 합니다. Collect the cells into a centrifuge tube, and briefly centrifuge to precipitate the cells. Discard the supernatant and add 1 ml of Assay Buffer for every 5,000,000 cells. Sonicate at 20% power in 3 second bursts with a 10 second rest interval, for 30 bursts in total. Centrifuge at 8000 × g at 4°C for 10 minutes. Transfer the supernatant to a new tube, keep on ice and analyze immediately. 위의 sample 준비 과정에서 5x10^6를 1ml assay buffer를 넣으라고 하는데 cell seeding > 시약처리 > cell counting 해서 5x10^6 cell 만큼의 cell을 tube에 넣고 centrifuge하고나서 여기에 assay buffer를 1ml 넣으면 되는건가요? 제가 이해한게 맞는지 확인부탁드립니다.
회원작성글 SLYSH  |  09.23
Q. Raw264.7 물질처리 9시간 후 이상반응 문의 첨부파일
안녕하세요. Raw264.7 세포를 이용하여 생존율 확인하는 중  0.1ug/ml 농도로 물질처리 9시간 후 세포의 형태가 이상하여 질문드립니다. 48well plate 에 5x10^4 로 계산하여 seeding 하였고, 0.1, 1, 10 ug/ml 농도별 3반복씩 물질처리 하였습니다. 9시간 후 현미경 관찰 시 0.1ug/ml 농도 처리 3반복 well만 첨부한 사진처럼 변했습니다. 똑같은 plate가 하나 더 있었는데 그 plate 상 0.1ug/ml well은 멀쩡했구요.. 사진의 핵?막?같은건 뭐라고 판단하시나요.. 오염된걸까요..?    
회원작성글 펩시라임  |  09.22
Q. C2C12 cell culture confluency
안녕하세요. C2C12 cell을 저번주 금요일에 thawing down 해서 이틀 후에 확인하여 90% 정도 confluency가 찼을 때 split을 하고(vial은 안 만듦) 다시 이틀 후에 15cm dish로 subculture를 했는데 그 때는 처음보다 confluency가 더 많이 차 있었습니다.  제가 이 세포의 doubling time을 착각해서 confluency 가 너무 많이 찼을 때 계대를 했는데, 이미 분화가 시작 되어서 이 세포로 실험을 진행하지 못할까요..? 그동안 만들어둔 vial도 이제 분화 및 추출처리 실험에 사용하지 못하는 건가요?ㅠㅠ 그리고 differentiation 유도가 된지 안된지 잘 모르겠는데, 단순히 morphology 만 보고 알 수 있는건가요? 귀한 세포인데 큰 실수를 한것같아서 너무 조마조마합니다. c2c12 cell에 관한 자세한 조언 등등 부탁드립니다. 감사합니다.
회원작성글 mintim99  |  09.22
Q. antibiotics selection 시 media
G418 항생제를 통해 selection test를 해보려고 합니다. media에 G418을 농도에 맞게 넣은뒤 cell에 처리한다고 하는데 이때 ampicillin이 없는 FBS만 포함된 media를 사용해야하나요?? 아니면 ampicillin이 포함되어 있어도 상관없나요??
회원작성글 빙글뱅글  |  09.22
Q. iPSC 배양용 Essential 8 배지 써보신분
fibroblast로 episomal reporgramming 해서 ips를 만드려고 하는 중인데요.   episomal reprogramming kit를 이용하는데 여기 protocol에 essential 8 media를 쓸때는 37도에서 데우지 말고 상온에 둬서 찬기가 없어질때까지 두라는데 이렇게 사용하는게 맞는건가요?   "Before use, warm complete medium required for that day at room temperature until it is no longer cool to the touch. Do not warm the medium at 37°C."   주말에도 나와서 배지교환해줘야 하는데 37도에서 데우기 없이 상온에서 두려면 시간이 꽤 걸릴것 같아서요ㅜㅜ   essential 8 배지 사용해보신분 계시면 이렇게 사용하셨는지 37도에서 데워도 상관없는지 궁금합니다.
회원작성글 him  |  09.22
Q. Cell homogenate의 glycerol assay kit를 cell media에 써 보신 분 있을까요?
안녕하세요 3T3-L1 분화 실험 중인 대학원생입니다....  다름이 아니라, 지금까지는 분화 끝내고 oil red o로 분화 정도를 확인하였었는데 이번에는 cell media의 glycerol을 측정하여 비교하려 합니다.  추천받은 키트의 프로토콜을 확인하니 cell homogenate를 이용하는 게 실려있던데, cell media도 같은 방식으로 실험해도 괜찮을까요? 괜찮다면, serum free 배지 같은 걸 48시간 정도 처리하면 glycerol이 충분히 나올까요..?   감사합니다.
회원작성글 버티기  |  09.22
Q. ihc염색시 보이는 그림 질문 첨부파일
안녕하세요 논문공부를하고있는 학부생입니다  다름아니라 d,e,f그림을 보려고 하는데  실험은 종양조직을 가지고 세포사멸에대해 분석한건데 ihc그림에서 d에서 rb가 인산화 덜된것은 관찰이 되어서 e그래프에 저렇게 나온게 이해가 되는데  d그림에서 p-ampk가 분명 육안으로 4-oht, rg2를처리하면 줄어든것처럼 보이는데 그래프에서는 늘어났다고 보여서 제가 보는법이 틀렸나 질문드립니다. 
회원작성글 쿠키크림  |  09.22
Q. 이거 컨탐일까요..? 첨부파일
안녕하세요 a549 mtt를 하고 있는 학부생입니다. 셀 시딩할때 2well에 버블이 생겨서 별 생각 없이(ㅠㅠ) 석션하고 다시 배지를 깔았어요.. 항생제 처리 할때까지는 셀이 안 자라기만 했었는데 오늘 MTT처리하려고 보니까 이상한게 생겨서.. 이게 컨탐일까요? 아니면 뭘까요..
회원작성글 으뚠이  |  09.22
Q. 세포 normalize 방법 (2)
이전 글에 추가 질문입니다.. A와 B라는 세포는 종류가 다릅니다 citrate synthase assay kit을 이용해 비교하려고 하는데 세포 5,000 개 당 citrate를 얼마나 생성했는지 확인하려고 합니다. 여기서 A와 B의 갯수가 동일하다는 normalize가 고민입니다. WST 시약으로 하기엔, A와 B의 mitochondrial dyhydrogenase가 동일하다고 보기 어려운데.. 좋은 방법 있을까요?   세포 5,000 을 counting은 설득력이 떨어지는 것 같아서..
회원작성글 모자  |  09.21
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