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Q. Luciferase를 FACS로 확인
Luciferase를 FACS로 확인 해보신분 있으실까요 ? 
회원작성글 실험이궁금해요  |  08.17
Q. 고수님들 ELISA 실험 도와주세요!
Thermofisher ELISA kit로 진행하는데요. 프로토콜대로 standard를 만들어서 흡광을 찍었는데, OD 값이 0.9~0.95 정도 나오는게 맞다는데 ,,  동일한 실험 3번 진행했는데도 0.45~0.5 나오네요. standard를 DW에 10~30min 정도 희석하라는데,, 보통 10분 정도 희석했는데,, 희석이 잘 안되고, 잘 안 섞인 건지,,,,,   이럴 경우엔 보통 뭐가 문제일까요?
회원작성글 minchodan  |  08.16
Q. FACS cancer cell line compensation
보통 면역세포에서 여러 개의 항체를 보려고 FACS할때 compensation을 진행하는데, cancer cell line으로 FACS를 할 경우 교수님 말씀으로 어떤 이유 때문에 compensation을 할 수가 없다고 하는데요. 이러면 compesation을 못하는 만큼 각각 따로 해줘서 FACS tube가 너무 많이 나오게 돼요ㅠㅠ.. 혹시 암세포 FACS 할때 compensation 하는 방법이나 해결책이 있을까요?
회원작성글 개똥이야  |  08.11
Q. 돼지피에 ABO형 시약을 처리한다면 응집될까요?
돼지피는 혈액형이 인간보다 많은 걸로 알고있는데 ABO시약을 돼지피에 넣는다면 하나라도 응집되는게 있을까요? RH+,- 여부도 알고싶네요
회원작성글 흔한수시러  |  08.06
Q. 바실러스 튜링겐시스를 배양할 때
분류는 무시하고 봐주시면 감사하겠습니다!!       1 LB 액체 배지에 배양이 가능하나요?  대장균 전용 배지로 알고 있는데, 바실러스 튜링겐시스를 배양 할 수 있는지 또 다른 구하기 쉬운 배지 중 바실러스 튜링겐시스를 배양 할 수 있는 배지가 있는지 알려주세요! LB 배지로 배양을 하여 실험을 한 사례나 LB 배지 사용이 가능하다는 내용이 담긴 논문 같은 출처도 알려주시면 너무너무 감사하겠습니다.   2. PC Broth (액체상태의 Plate Count 배지로서, 대부분의 세균을 배양하는데 사용) 배지에서도 바실러스 튜링겐시스 배양이 가능할까요??   어디에서 더 잘되는지 둘 다 어느 정도 잘 되는지 알려주시면 감사하겠습니다.   3. 또한 생물자원센터에서 바실러스 튜링겐시스와 백강균을 동결 건조 상태로 분양 받으려고 하는데 활성화 시켜 배양하는 방법도 알려주시면 감사하겠습니다ㅠㅠ 한 가지 질문이라도 답변해주실 수 있다면 꼭 답변해주세요. 또한 가능하다면 답변의 근거가 되는 논문이나 책과 같은 출처도 알려주시면 정말 감사하겠습니다.  
회원작성글 afffdfdee  |  08.05
Q. Prism survival 그래프 값 수정
prism program을 이용하여 survival 그래프를 그리고 있는데요. 50%에서 끝나는데, y축 값 0 까지 line을 어떻게 만드는지 아시는분 계신가요? 이것저것 눌러봐도 잘 안되서 올리게 되었습니다. ex. 파란선 그룹은 28일에 모두 죽었으니까 20과 40 사이에 파란색 라인이 생겼으면 합니다. 통계프로그램이라서 그런지 단순하게 data  부분에 0을 추가하면 제가 원하는 그래프를 못얻더라구요.ㅠ   이 프로그램을 조금이라도 아시는 분들은 답변 해주시면 정말 많은 도움이 될 것 같습니다. 미리 감사합니다!   아래 그래프 처럼 하고싶습니다 .
회원작성글 I아니  |  08.03
Q. 세포에 형광염색할때
안녕하세요. 세포실험은 초짜인 대학원생입니다. 저는 mammalian cell에 bacteria를 처리한 후 약물처리를 해서, bacteria가 줄어드는 양상을 현미경으로 관찰하는 실험을 하고 싶습니다만... 저희 연구실에서 아무도 해본 적이 없고 저도 처음이라서 막막하여 글을 남깁니다. 1. 항체는 꼭 2차까지 처리를 해야하나요? 만약 Mammalian cell의 세포질을 타겟하는 형광이 붙은 antibody와 bacteira를 타겟하고 형광이 붙은 antibody가 존재한다면 그 두 개를 동시에 처리하고 바로 형광 현미경을 보아도 될까요?? 2. 찾아보니 Mounting용액에 DAPI가 섞인 제품도 있던데 ... mounting?? 봉입체?? 를 꼭 해주어야하는건가요? 그리고 mounting 용액에 DAPI가 들어간 것은 DAPI가 핵을 염색시키면 그 후에 추가 wash과정 없이 현미경을 보는 건가요? ㅠㅠ 초보라 질문이 많고 기본적인것일수도 있지만 아시는 분은 상세한 답변 부탁드리겠습니다.
회원작성글 와디와디  |  08.03
Q. CD3를 없애주었는데 분화6일 째에 생겼습니다...?
   CB에서 CD3를 아웃시켜주었습니다 분화 6일차에 CD56 값은 증가하였는데 웬 CD3가 생겨났어요 ㅠㅠ.. 실험 고찰을 적어야하는데 왜인지 감이 안잡힙니다 도와주세요 ㅠ.ㅠ
회원작성글 카리나  |  08.03
Q. NK92 cytotoxicity 데이터 해석 부탁드립니다ㅠㅠ
calcein 이용했구요 target은 K562 입니다 원래 10:1에서 60-70%는 나와야하는데 값이 왜이렇게 낮게 잡혔을까요 실험 결과에 대한 고찰을 써야하는데 어떤 부분이 문제였는지 감이 안잡혀요ㅠ
회원작성글 카리나  |  08.03
Q. rapid kit 관련 시약들의 역할이 궁금합니다.
nanogold rapid kit제작에 관련하여 각종Buffer에 들어가는 조성(EDTA,Tween등)이나 Membrane에 분주하는 항체들과 섞어주는 용액들(tsurcose,PBS,)등 의 역할에 대해 공부를 할 수 있는 논문이나 사이트등이 있을까요...
회원작성글 미미생큐  |  08.01
Q. 바이러스도 면역체계가 있는지요
실험에 관한 질문은 아니지만 여기다 질문남겨 봅니다. 검색해도 찾을수가 없네요.   바이러스 자체에도 면역체계가 있는지요? CRISPR-Cap9가 미생물의 면역체계이고 antibody 등은 mammalian 의 면역체계인데, 바이러스는 이러한 면역체계가 없을까요? mutation 자체가 면역체계이다.. 라고 이해하고 넘어갈 수 있겠지만, 혹시나 싶은 마음에 질문남겨 봅니다. 작은 힌트라도 미리 감사드립니다.
회원작성글 YKim  |  08.01
Q. ELISA_A549 cell에서 IL-6와 IL-8 결과가 달라요ㅠㅠ 도와주세요!
안녕하세요! 제가 A549 CELL에 추출물을 처리하여 IL-6, IL-8 분비량을 확인하려 하는데요,, IL-8은 유의하게 수치가 낮아졌는데 같은 샘플로 IL-6 ELISA를 찍어보니 효능이 하나도 없습니다,,ㅠㅠ 다시 sample prep했을때도 같은 결과구요,, 약물대조군은 유의하게 두 사이토카인 발현을 억제했고 세포 자극도 유의하게 잘 됐습니다ㅠㅠ 왜 이런 양상으로 사이토카인이 분비되는걸까요?ㅠㅠ 특이적으로 IL-8만 분비가 억제 됐다고 봐야되는걸까요? 재현성 실험해봐도 같은 양상이고 답이 안나와서 질문 드려요,, 도와주세요!!!
회원작성글 sjsj3636  |  08.01
Q. cytoflowmetry 분석 관련 질문입니다
안녕하세요, 늘 브릭을 통해 많은 도움을 받고 있습니다. 이번에 하고 있는 연구로 인해 외국 연구실에 교환학생을 오게 되었습니다. T cell 활성화 관련 실험을 진행하고 있는데요, cytoflowmetry 경험이 별로 없어서 첫주부터 진행이 막혔습니다ㅜㅜ 영어가 짧은 탓에 대혼란을 겪고 있습니다... 거두절미하고 질문을 드리자면, NFAT-GFP tag된 T cell을 live/dead cell stain 한 뒤 cytoflow 찍었습니다. 아래 데이터는 별도로 activation 시키지 않은 세포의 분석결과인데요.   보시면 GFP signal이 뜹니다. anti CD3/CD28 친 실험군이랑 별반 차이도 없어요. 바보같은 질문이지만 원래 항상 NFAT의 GFP가 뜨나요? 활성되었을 때만 뜨느 게 아닌가요?? 대체 뭐가 문제일까요...... 월요일에 교수님과 미팅인데 큰일났네요. 절박합니다...... 도움부탁드립니다 .... 감사합니다ㅜㅜ
회원작성글 9383  |  07.30
Q. 마우스에 LPS 주사 후 죽는 것에 대해 질문드립니다.
염증모델 실험위해 쥐에게 LPS를 i.t 주사하고 있는데  예비 실험에서 건강에 문제 없이 충분히 생존 가능한 농도 확인하고 실험을 진행하였는데 본 실험 들어오니 갑자기 쥐들이 자꾸 죽기 시작하네요   마취제로는 Avertin 사용 중이고 LPS 농도도 다른 문헌과 비교했을 때 그리 높지 않은, 오히려 낮은 편인 농도로 주사 중입니다. 죽은 쥐들 해부했을 때 복숙 차있는 등 염증성 지표가 보여 아마 급성으로 염증이 심하게 올라와 죽은거 같은데   지금 생각으로는 Avertin이 초기 염증 반응을 강화시킨다는 문헌이 있어 마취제로 Avertin을 사용하여 이런 일이 발생한 것인가 싶은데 혹시 Avertin 사용하는 연구실에 계신 분 있으시면 비슷한 일이 있으셨는지 여쭤보고 싶습니다. 
회원작성글 1q3e5t7u!  |  07.30
Q. ELISA 계산 식..
ELISA 를 하고 있습니다 계산식이 이해가 안가서 질문 드립니다.   ELISA를 하고 o.d 결과 값이 나왔는데요    (sample o.d. 값 - blank o.d. 값) / standard 기울기 / 단백질 정량 값 * std 최대 농도값   으로 계산하는데요 여기서 왜 std 최대 농도값을 마지막에 곱하는지 궁금합니다.. 아시는 분 답변 부탁드립니다.
회원작성글 스뚜  |  07.29
Q. Jurkat, mouse CD4에서 ChIP sonication 조건잡는데 조언이 필요합니다.
안녕하세요 이번에 jurkat이랑 mouse primary CD4+ T cell에서 ChIP을 하고자 ChIP 실험 조건 세팅하고 있습니다. 저희 방이 ChIP을 많이 하지 않아서 경험 많으신 분들의 조언을 구하고 싶습니다. 우선 제가 현재 사용하는 protocol은 upstate에서 나온 protocol을 토대로 진행하고있습니다. T cell이 suspension cell이기 때문에 formaldehye를 처리하기 전에 cell을 걷어서 centri로 다운시키고 media에 풀어서 counting한 뒤 실험을 진행했습니다. -Add formaldehyde(final conc. 1%) to cells in media, incubate 10min, RT -Add glycine(final conc. 0.125M), incubate 5min, RT -Centrifuge at 4℃ -Wash with cold PBS, centrifuge, discard supernatant (repeat 2 times) - Lysis with 1ml SDS lysis buffer (1% SDS, 10mM EDTA, 50mM Tris,pH7.5) per 2 x10^7 cells -Aliquot lysates 300ul per IP tube --> sonication(bioruptor) -Centrifuge sonicated sample -Transfer 10ul from supernatant, mix with loading dye, boil for 3 min, check the fragments by gel electrophoresis(2% agarose gel) 우선 sonication 조건부터 잡으려고 위의 step까지 진행해서 여러가지 sonication 조건으로 test해보고 있는데, 전기영동을 해보면 결과가 다음같습니다. 위 사진은 10sec ON/30sec OFF 를 30cycle(왼쪽lane), 40cyle(오른쪽 lane)로 sonication해본 결과입니다. 저는 대략 500bp 전후의 fragment를 원한는데 왼쪽 lane에서 보면 200bp size쯤에서 band가 확인되고 오른쪽 lane은 거의 band가 보이지 않습니다. 또 양쪽 lane에서 모두 1~3kb에서 smaer하게 보이는 band가 있는데 sonication이 덜된것처럼 보이지만 sonication 조건을 다르게 test해도(30sec ON/ 30sec OFF를 10cycle, 20cycle 해보는 등) 저것과 거의 똑같은 결과가 나옵니다. 1kb 넘는 smear한 band를 최대한 없애려면 sonication cycle을 더 늘려봐야 할까요? 아니면 crosslinking이 너무 과도하게 됐거나 lysis가 제대로 되지 않은 문제일까요? 어떤 부분에서 문제가 되는 것인지 감이 잡히지 않아 고민이 많습니다. ㅠㅠ 또 추가적으로 궁금한 점이 있는데 혹시 formaldehyde처리하기 직전 media에 있는 cell의 농도 또한 중요할까요? counting한 뒤 formaldehyde를 media volume에 맞춰서 넣어줬는데 이때 cell concentration에 대한 부분은 고려하지 못해서 혹시 이것이 큰 문제가 될까 싶습니다.
회원작성글 디디둔둔  |  07.28
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