prism program을 이용하여 survival 그래프를 그리고 있는데요. 50%에서 끝나는데, y축 값 0 까지 line을 어떻게 만드는지 아시는분 계신가요? 이것저것 눌러봐도 잘 안되서 올리게 되었습니다. ex. 파란선 그룹은 28일에 모두 죽었으니까 20과 40 사이에 파란색 라인이 생겼으면 합니다. 통계프로그램이라서 그런지 단순하게 data  부분에 0을 추가하면 제가 원하는 그래프를 못얻더라구요.ㅠ   이 프로그램을 조금이라도 아시는 분들은 답변 해주시면 정말 많은 도움이 될 것 같습니다. 미리 감사합니다!   아래 그래프 처럼 하고싶습니다 .

calcein 이용했구요 target은 K562 입니다 원래 10:1에서 60-70%는 나와야하는데 값이 왜이렇게 낮게 잡혔을까요 실험 결과에 대한 고찰을 써야하는데 어떤 부분이 문제였는지 감이 안잡혀요ㅠ

염증모델 실험위해 쥐에게 LPS를 i.t 주사하고 있는데  예비 실험에서 건강에 문제 없이 충분히 생존 가능한 농도 확인하고 실험을 진행하였는데 본 실험 들어오니 갑자기 쥐들이 자꾸 죽기 시작하네요   마취제로는 Avertin 사용 중이고 LPS 농도도 다른 문헌과 비교했을 때 그리 높지 않은, 오히려 낮은 편인 농도로 주사 중입니다. 죽은 쥐들 해부했을 때 복숙 차있는 등 염증성 지표가 보여 아마 급성으로 염증이 심하게 올라와 죽은거 같은데   지금 생각으로는 Avertin이 초기 염증 반응을 강화시킨다는 문헌이 있어 마취제로 Avertin을 사용하여 이런 일이 발생한 것인가 싶은데 혹시 Avertin 사용하는 연구실에 계신 분 있으시면 비슷한 일이 있으셨는지 여쭤보고 싶습니다. 

암이나 염증 관련 세포실험할 때 종종 세포를 키운 후 세포에서 나온 물질이 있는 media에 다시 세포를 키우는 경우가 있는데 이를 실험적 명칭으로 뭐라고 하나요? 그리고 이러한 실험을 왜 하는 건가요? 

안녕하세요. 이번에 Multiplex cytokine assay 를 진행하려고 합니다. 외주 업체에 맡겨서 진행할까 하는데, 혹시 많이 사용하시는 업체가 있을까요?  제가 찾아본 곳으로는 래비스고마, 코스모진택 과 같은 업체가 있고, 웅비메디텍에서도 Luminex 분석을 하는 것 같습니다. 많이 사용하시고, 분석을 잘 하는 업체가 있다면 추천해주시면 감사하겠습니다!!

안녕하세요.  FACS 관련하여 질문드리고 싶습니다. permeabilization 단계에서 Foxp3 buffer 를 사용하게 되는데 이 단계부터 상온에서 incubation 을 해야하는 이유를 잘 모르겠습니다.  바쁘시겠지만 알려주신다면 정말 감사드리겠습니다.

안녕하세요 초보 대학원생입니다.   xenograft tumor로 IHC DAB를 진행하는데 갑자기 염색이 너무 이상하게 되서요ㅠㅠ  첨부한 사진처럼 너무 진하게 나오는데 DAB 발색이 너무 진해서 그런걸까요 다른 문제일까요...ㅠㅠ   조직은 oct compound로 얼려서 cryosection으로 진행하였습니다.   HIF-1a, CD31을 염색하였는데 모든 슬라이드가 저러는데 문제점이 무엇일까요ㅠㅠㅠ

NK92와 제대혈에서 직접 분화시킨 NK의 차이는 뭐죠 media도 다르던데 둘의 차이가 궁금합니다ㅠㅠ  

사람조직에서 세포 추출 후 Facs 분석 예정인데요 안티바디는 3가지 사용하려고 하고 Facs 분석의 목적은 과연 이 조직에서 추출한 세포가  우리가 생각한 그 세포가 맞냐 아니냐 확인만 하려는건데요 분석에 필요한 세포 수가 250만 정도는 있어야 하고   보통 당일 나온 조직받아서 실험해보면  세포가 적게는 80만 많게는 500만까지 추출되는데 대부분이 150만 정도 밖에 안나와요 아무래도 분석 당일 세포 수가 부족할 것 같은데 같은 사람에서 나온 세포가 아니어도 될까요? 같은 부위 조직인데 A라는 사람과 B라는 사람에서 나온 세포 서로 섞어도 될까요?    

생명 2 정규학습 외 남는 시간에 재미삼아 발표를 해보려 하는데요 면역 항암법 주제로 발표해보고 싶어서 면역관문억제제 개념이나 기능 정도 까지는 조사가 되는데 구체적으로 anti-PD-1이나 anti-PD-L1이 PD-1와 PD-L1에 들러 붙는 자세한 원리를 조사하기가 힘들어서 질문합니다 쉽게 좀 알려주시면 진짜 감사하고 아니면 고딩수준에서 쉽게 조사할 수 있는 곳 링크라도 걸어주시면 감사하겠습니다

https://www.jove.com/kr/v/58490/unraveling-key-players-humoral-immunity-advanced-optimized-lymphocyte   안녕하세요 선배님들! 갓입학한 석사 새내기입니다. 다름이 아니라 세포 분리 실험을 진행하면서 프로토콜 및 동영상 보고 실험해보려 하는데 학교 IP 가 구독이 되어있지 않다고 해서 못보고 있는 실정입니다 ㅜㅜ  혹시 PDF 파일이나 동영상 파일 보내주실 수 있으신 분 계시면 부탁드려도 될까요! 감사합니다..

안녕하세요 저는 고마바이오텍의 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit 제품을 사용하려고 하는데 protocal 문의드립니다  분석하고자 하는 세포를 약1x106cells/ml로 준비한다. 0.5ml의 세포 현탁(5x105cell/ml)을 microtube로 옮긴다. 1000 x g로 5분간 상온에서 원심 분리하여 배양액을 제거한다. 차가운 PBS 0.5ml로 세포를 부드럽게 풀어준다. 1000 x g로 5분간 상온에서 원심 분리하여 PBS를 제거한다. 차가운 1x binding buffer 0.5ml로 세포를 부드럽게 풀어준다. 1.25ul의 annexin V-FITC를 가한다. 반응물에 빛을 차단하고 상온에서 15분 반응시킨다. 1000 x g로 5분간 상온에서 원심 분리하여 상층액을 제거한다. 차가운 1x binding buffer 0.5ml로 세포를 부드럽게 풀어준다. 10ul의 propidium iodide를가한다. 반응물을 빛을 차단하고 냉장 보관한다 (4℃) 빠른 시간 내에 유세포분석 (flow cytometry)또는 형광현미경으로 분석 한다.   7. .25ul의 annexin V-FITC 양을 늘려도 될까요? compensation 하니 fitc가 너무 적게 잡혀서요 annexin v 다른 키트는 1:1 비율로 pi fitc 넣는 것 같아서요 

안녕하세요! 동물실험을 하다가 궁금한 점이 있어서 이렇게 질문하게 되었습니다. 마우스 i.p로 마취와 안와채혈을 하고 나면 마우스 눈이 하얗게 변했다가 점차 시간이 지나니까 원래 빨간색으로 돌아오더라구요..혹시 마우스 안구색이 변하는 이유가 있을까요?

Western blot 과정 중 transfer 후에 ponceau 용액에 membrane을 담궈서 band 확인할 때 band가 안뜨는데 왜 그런지 아시는 분 있나요? 폰슈에서 안나오고, 마지막 detection까지 해도 band가 보이지 않습니다..transfer가 끝난 membrane을 보면 marker는 잘 묻어나는 걸 보면 transfer과정에서 큰 문제는 없었던것 같은데 왜 그럴까요?ㅜㅜㅜ Protein 양=10ug 정도 PVDF membrane (Methanol로 적셔서 활성화 시킴) transfer 조건= 100 V, 60 min (-) Sponge-filter paper-gel-PVDF membrane-filter paper-sponge (+)

안녕하세요 Starflower입니다. Cryosection이 잘 안되서 이렇게 질문드립니다. Mouse whole brain을 coronal 방향으로 section 하려합니다. 오늘 사용한 sample의 경우 제가 만든 sample은 아니지만 PBS, 4%PFA로 관류 후 30% sucrose에 두고 가라앉힌 다음 드라이아이스에 에탄올을 넣고 oct compound로 굳혀 만든 sample로 알고 있습니다. 그리고는 -80도에서 보관하고 있었고, cryostat에서 1시간정도 두어 온도를 맞춰줬습니다. mold가 너무 커서 면도칼을 이용해서 주변 oct 정리 좀 한 뒤 section을 하니까 문제가 발생 했습니다. 문제는 크게 4가지 입니다. 1. 조직과 함께 oct가 계속 말립니다. 2. 절삭할 때 쭈글쭈글하게 나옵니다. 3. oct와 함께 붙어 나오지 않고 조직과 분리됩니다. 4. slide glass에 붙일 때 bubble이 너무 많이 들어갑니다. 바로 slide glass에 붙이는 방식으로 하려는데 이러한 문제들이 있습니다. 어떻게 하면 고칠 수 있을까요

 안녕하세요 고등학교에 재학 중인 학생입니다. 학교에서 전신획득저항성(SAR) 관련 실험을 진행하고 있는데 한가지 큰 차질이 생겨 질문 남기게 되었습니다.  SAR 유도 물질로서 알려진 살리실산을 처리한 뒤(無, 0.5mM, 1.0mM) 방울 토마토 모종에 Xanthomonas perforans을 처리하였는데요, 현재 10일 가량 지난 시점에서도 감염 부위가 전혀 보이질 않습니다.  세균 처리 전, 현탁액의 CFU를 측정하고 처리하려 했으나 시간 관계상, 목적상(감염) 크게 중요하지 않을 것 같아 건너뛰어 대략적인 농도는 말씀 드리기 어려울 것 같습니다.  첫 처리 땐 백금이로 고체 배지에서 5번 긁은 만큼 200mL 증류수에 넣어 분무기로 5회 엽면 처리하였고, 이후 5일 뒤에는 1번/200mL, 10번/200mL의 두개의 현탁액을 만들어 분무기로 5회 엽면 처리, 스포이트로 2.5mL 엽면 처리, 5mL 관주 처리(토양)에 했습니다.  뒤늦었지만 세균 처리한 논문을 여러개 찾아보았고, 본 실험과 습도, 온도, 처리 방법에 차이가 있다는걸 알게되었습니다.  내일인 월요일에는 0.9% NaCl 용액, 증류수를 각각 200mL씩 사용하여 처리한 후, 비닐 랩으로 간이 온실을 만들어 가습기와 전등을 함께 비치할 생각입니다.  위 실험 과정의 어떠한 문제점 때문에 감염이 일어나지 않는지 알고 계시다면.. 피드백을 간곡히 부탁드립니다.. ㅠㅜ

안녕하세요. macrophage therapy에 관심이 있어 질문드립니다. 1. 사람을 기준으로, 혈액에서 macrophage를 분리하고 배양하여 다시 주입 시 GVHD가 나타날까요? (autologous) 2. 사람을 기준으로, THP-1(human monocyte cell line)을 주입하면 GVHD가 나타날까요? 3. 사람을 기준으로, Raw264.7(mouse macrophage cell line)을 주입하면 GVHD가 나타날까요? 4. 쥐를 기준으로, THP-1이나 사람 혈액에서 분리한 macrophage를 주입하면 GVHD가 나타날까요? (vein injection 기준으로 여쭤봅니다) 논문들을 찾아봐도, 어떤 논문은 그렇다, 어떤 논문은 아니다 라고 상이한 내용이 있어, 경험이 있으신 선생님께 부탁드리겠습니다. 간단하게 네, 아니요 라고만 해주셔도 감사하겠습니다.

두가지 실험 모두 매독을 검사하는 실험인데 왜  VDRL만 보체를 불활성화 시키는 과정이 필요한지 궁금합니다!!  

dab staining을 처음 진행하였는데 이미지 분석하는데에 궁금증이 생겨 질문드립니다. 제가 마우스 skin을 떼서 frozen section하여 hair follicle관찰을 위해 dab stainig을 진행했습니다. 여태 형광염색을 했는데 잘 안나와서 툴을 바꿔보았습니다ㅜ 1ab로 ki67을 붙였는데 이미지를 보니, 빨간색 화살표로 가리킨 갈색침전물은 ki67이 발현된 부분이겟죠? 그럼 이부분 말고 아래쪽에 hair follicle부분도 검은색으로 염색이 되었는데 이 부위는 ki67과는 관련없는 그냥 멜라닌 색소 침착?같은 건가요?? 그리고 전반적으로 background도 색이 연하게 떴는데 dab반응 시간을 늘려야되는건가요? 저는 9분정도 반응시키고 갈색으로 바뀐거 확인하고 마운팅하였습니다. dab 초보라 도움 부탁드립니다ㅠ