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 카테고리: 전체 > Immunology > etc.
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Q. Fixation된 조직 FACS 가능한가요?
4일에도 질문을 올렸습니다만, 급해서 다시 질문을 올립니다.   저희 실험실에서 형광 tag된 살아있는 세포만 갖고 sorting한 적은 많은데 조직이나 항체를 붙여서 cell population을 분석해본 적은 없습니다. 일단 FACS 자체는 들어보니까 옛날부터 살아있는 세포만 가능하다. 라는 의견들이 대부분이고 논문들을 찾아봐도 이미 Fix된 조직을 갈아서 한 논문을 찾기가 쉽지가 않네요. 아니면 제가 메소드를 잘 읽어보면 있을 것 같긴한데 키워드를 거기에 집중해서 찾아서 모르는 걸 수도 있고. 교수님도 살아있는 세포나 가능하다.라고 하는데 막상 항체를 이용해서 sorting하는 protocol을 보면 2% formalin으로 fixation한 후에 항체까지 처리하고 염색까지 하는데... 어... 사실상 저정도면 세포가 거의 죽기 직전..혹은 cross-link에 의해서 죽은 것과 마찬가지...아닌...가요?;; 그나마 겨우 찾은 논문도 제가 brain으로 진행을 할거라 brain으로 찾았는데 끽해봐야 핵을 분리한 다음 NeuN 붙여서 neuron만 분리했다. 정도고 그외에 찾아본 논문은 fiaxtion 12시간 후에 single cell로 갈아서 (주로 18,20,23,25게이지 주사기로 단계별로 갈아버린듯함) Enzyme 처리해서 진행한 것 같구요. 그 이후 RNase inhibitor 처리한 상태에서 1차, 2차 항체, DAPI 처리하고 본게 전부네요. 이 논문은 neuron 종류별로 (somatostatin, pavalbumin, calbindin 등.) 분리해내는데 성공했습니다.  그리고 FACS 담당하시는 선생님께서도 꼭 살아있는 세포가 아니어도 된다.대신 조건은 선생님이 잡아보시고 테스트해봐야한다..고 하시더라구요..   singlecell로 갈아서 고정시키고 facs돌리는것 보다 이미 고정된 조직을 single cell로 갈아내기가 힘들긴한데..그리고 single cell isolating kit를 파는 업체도 있어서 아얘 불가능할 거 같진않은데........혹시 해보신분 계신가요?
회원작성글 토라  |  02.07
Q. Conventional mouse에게 물리면 어떻게 될까요?
안녕하세요 Nc/Nga mouse였고 아토피 유도된 쥐였는데 꽤 깊게 물려서 피가 철철 났습니다..ㅜㅜ 걱정되어서 찾아보니 대부분은 괜찮지만 conventional mouse에게 물리면 좋지 않다고 하는데 그 이유는 무엇일까요? 그렇다면 저는 어쩌면 좋을까요? 너무 걱정됩니다... 조언 좀 부탁드립니다 선생님들..ㅜㅜ 감사합니다
회원작성글 쥐돌이귀여워  |  02.03
Q. IHC high background 및 control이 염색 됩니다.
안녕하세요, 현재 IHC 컨디션을 잡고있는 대학원생입니다. 고수분들의 의견을 얻고자 질문글을 올립니다. DAB으로 staining을 하는데,  Background가 너무 심하게 잡히며 특히 처리 하자마자 색이 변할정도로 반응이 너무 빨리일어나기도 하고 Control에서 계속 염색이됩니다... 2차 항체를 1:1000으로 dilution하니 조금 덜하긴 해도 계속해서 염색이됩니다.   Peroxidase Quenching 10분, Pressure cooker 및 Trilogy로 deparaffinize, antigen retrieval 하였습니다. Control은 두가지가 있습니다. 그 Control 군에 1차 항체 단계에서 No antibody (PBS), Rabbit IgG 를 사용했고 10% Normal Goat serum blocking, 2차 항체 Goat anti-rabbit 사용하였습니다. DAB은 Vector laboratory에서 제시한 프로토콜 대로 사용하고 있습니다.   현재 생각해본 개선점으로는 1. Wash buffer로 PBS-0.1% Triton X-100 을 사용중입니다. TritonX-100을 Tween20으로 바꿔보려합니다. 2. DAB을 더 Dilution 해보는 것도 좋을 것 같습니다. 3. Wash 를 더 많이 해보려 합니다. 4. Antigen retrieval 시 Pressure cooker를 사용했는데, 이게 damage를 주었을 수 있을 것 같습니다. Microwave로 바꿔서 시도해보려 합니다.   위 네가지 외에 제가 더 해봐야할 부분이 있을까요? 감사합니다.
회원작성글 으딩딩  |  01.23
Q. Mouse splenocyte 색 관련해서 질문드립니다...
제가 BL6 Mouse의 Spleen에서 splenocyte를 분리해서 실험을 하고 있습니다. 그런데 가끔 Splenocyte를 isolation한 후에 pelleting 하였을 때 한두마리씩 pellet 색이 이상하게 검은 개체들이 있었습니다. 이상하지만 계속 사용하였는데, 이후 실험에서 이러한 것들만 튀는 값을 가지는데 혹시 그 개체들에서 문제가 있는건지 궁금합니다. 분리방법은 RBC lysis, Ficoll 모두에서 이러한 현상이 나타납니다.
회원작성글 zxcvbn33  |  01.18
Q. plaque assay 질문입니다. 첨부파일
안녕하세요 Influenza a virus로 연구하고있는 대학원생입니다.  influenza a virus 로 plaque assay 진행중인데, 어느순간부터 staining하면 사진처럼 제대로 plaque 형성이 되지않고 모양만 남게되는데, 도저히 문제를 모르겠습니다. 혹시 저런현상 겪어보거나 해결방안 아시는분 도와주실 수 있을까해서 절박한 마음으로 올려봅니다.. 감사합니다.
회원작성글 뿌우  |  01.06
Q. 마우스 혈액 Drabkin's reagent assay
마우스한테 Matrigel을 주입하고 7일 이후에 Matrigel을 회수해서  PBS 10ml이 들어있는 15ml tube로 회수 할건데요. 24시간동안 overnight를 진행하고 다음날 10,000rpm, 10분간 centrifuge를 돌려서 분리된 상층액에서 1ml을 따서 Drabkin's reagent solution 1ml과 1:1 비율로 혼합후 540nm 에서 흡광도를 측정하려고 하는데요. 이후에 측정된 수치값을 어떻게 계산 해야 하는지 궁금해서 질문 드립니다. 물론, 상층액 흡광도 측정전에 Hemoglobin standard curve를 그릴것이구요 그거에 나온 기울기 값도 확인 할거에요.
회원작성글 medi92  |  2022.12.22
Q. 칼슘 정량
뼈에서 칼슘 정량할 때 어떤 방법이 있을까요?
회원작성글 호ㅗㅗㅓㅓ  |  2022.12.15
Q. 수지상세포가 T 세포 co-stimulation 정도 재고 싶을 때
안녕하세요, Dendritic cell이 T cell co-stimulation 하는 정도를 재야하는데 CD80나 ICOS 등 통한 co-stimulation의 정도만 보고 싶어서  T cell receptor는 어느정도 약하게? activate 시켜서 걱정 안할 수 있게 하고 싶은데 어떻게 하면 좋을까요? 피에서 추출한 naive T cell 에 그냥 넣어주면 적절히 MHC 랑 TCR 에 잘 붙는 그런 antigen/tetramer 있나요?  다른 제안도 감사드립니다.  
회원작성글 bluebird  |  2022.12.13
Q. IL-2 없이 NK cell culture
안녕하세요. 혹시 IL-2 없이 NK cell culture가 가능할까요? 저는 현재 LPS를 이용한 자극을 생각해보고 있는데, LPS로 IL-2를 대체 가능할까요?
회원작성글 dj_hwn  |  2022.12.07
Q. cell line 구매
안녕하세요. 석사 1학기 대학원생입니다. cell line 구매와 관련하여 도움을 받고자 글을 올리게 되었습니다. 이번에 C57BL/6 Mouse Bone Marrow Neutrophils (Catalog No. C57-6029F) 가 필요해서 구매를 하려고 코람 바이오텍에 문의 드렸더니 cell biologics 제품은 판매하지 않는다는 답변을 받았습니다.  그래서 다른 회사에 문의드리고 싶은데 코람 바이오텍과 같이 cell line 구매 대행업체에 대해서 알려주실 수 있으신지 여쭙고 싶습니다. 감사합니다.
회원작성글 나의라임오렌지나무  |  2022.12.02
Q. DTR mouse에 대해 알려주세요!!
안녕하세요! 학부 연구생입니다. 지금 연구참여하고 있는 랩실에 MGL-2 DTR 마우스가 있는데요. 이 마우스는 MGL-2도 발현하고 DTR도 발현하는 것인가요? 아니면 MGL-2 대신 DTR을 발현하는 것일까요?   구글에 아무리 찾아봐도 정확한 답은 찾기가 어려워서 이 곳에 질문드립니다.. 제발 알려주세요...!!!
회원작성글 paca  |  2022.11.29
Q. autotaxin
논문 공부하다가 이해가 안가는 부분이 생겨서요... ATX-LPA 신호 전달과정에 대한 inhibitor에 대한 효과를 나타낸 result입니다 ATX+LPC 자극 시에 왜 LPA 수용체 발현이 감소하는 건가요? inhibitor 처리하면 증가하는 이유도 알고싶습니다...  
회원작성글 소로리  |  2022.11.21
Q. FACS Blocking 좀 알려주세요ㅠㅠ
안녕하세요! FACS를 처음 공부해보는 석사생입니다!ㅠㅠ 저는 HL-60(Human) cell을 이용하여 CD11b를 FACS를 이용하여 측정하려하는데요! 저희 연구실에서는 mouse sample을 2.4G를 이용하여 blocking을 해주었는데 찾아보니까 mouse fc receptor blocking용으로만 사용하는거 같아서요ㅠㅠ human cell sample에서는 어떻게 blocking을 진행하나요ㅠㅠ,, 찾아보니 BSA를 이용하여 blocking해준다는데 이게 맞나요?,, 다 말이 달라서요,, 아니면 2.4G를 human sample에 사용해도 되는건가요? 논문 찾아보면 따로 blocking 했다는게 따로 명시가 안되어 있어서요,, 일단 저는 pellet 모아서 FACS buffer(0.5% BSA in PBS) 90ul+Ab 10ul을 넣은 후 4도에서 30분 둔 후, FACS buffer로 3회 wash를 진행하고 FACS를 찍어볼까 합니다,, Human cell pellet sample에서 blocking을 보통 어떻게 하나요?ㅠㅠ 위에 적은 protocol대로만 진행해도 괜찮을까요???? 도와주세요,,,,,,,,,,,,,,,,
회원작성글 sjsj3636  |  2022.10.13
Q. western blot 휘어짐 현상
안녕하세요! 이제 막 실험 배운지 3주 된 생초보입니다.. 오늘 실험을 끝내고 베타액틴 찍어보았는데.. 다른 분들 결과 보면 일직선으로 정말 이쁘게 나오더라고용  그치만 저는 왜 일직선이 아니고 갈수록 휘어지게 나온 것일까요? 결과 해석하는 데에는 문제없지만 그래도 의문이 들어 질문 올립니다. 이 문제에 대해 함께 고민해주신다면 정말 감사하겠습니다.
회원작성글 프롬이  |  2022.10.07
Q. 항생제 MIC 관련해서 질문있습니다.
실험실에 새로 항생제를 구입해 항생제 stock을 만들어야 합니다.  구입한 항생제 중 Penicillin G, potassium salt와 Tetracyclin HCl, Vacomycin HCl이 있습니다. 근데 이 항생제들의 MIC 관련 references를 찾지 못하였습니다.  이 항생제들의 MIC가 각각 Penicillin G, Tetracycline, Vacomycin의 MIC와 큰 차이가 존재하나요?
회원작성글 gPdls21  |  2022.10.07
Q. qPCR 프로토콜 질문
qPCR 프로토콜좀 알려주실 수 있나요. 아무리 찾아봐도 못찾겠습니다. 제가 찾는 방법을 잘 모르기도 하구요... 프로토콜을 찾을 수 있는 사이트라도 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 감귤서리범  |  2022.10.02
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2022년 실험Q&A 우수회원 안내
중고등학생의 과학실험주제나 방법 및 숙제에 대한 질문 자제 요청
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세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
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이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
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