안녕하세요! 제가 A549 CELL에 추출물을 처리하여 IL-6, IL-8 분비량을 확인하려 하는데요,, IL-8은 유의하게 수치가 낮아졌는데 같은 샘플로 IL-6 ELISA를 찍어보니 효능이 하나도 없습니다,,ㅠㅠ 다시 sample prep했을때도 같은 결과구요,, 약물대조군은 유의하게 두 사이토카인 발현을 억제했고 세포 자극도 유의하게 잘 됐습니다ㅠㅠ 왜 이런 양상으로 사이토카인이 분비되는걸까요?ㅠㅠ 특이적으로 IL-8만 분비가 억제 됐다고 봐야되는걸까요? 재현성 실험해봐도 같은 양상이고 답이 안나와서 질문 드려요,, 도와주세요!!!

ELISA 를 하고 있습니다 계산식이 이해가 안가서 질문 드립니다.   ELISA를 하고 o.d 결과 값이 나왔는데요    (sample o.d. 값 - blank o.d. 값) / standard 기울기 / 단백질 정량 값 * std 최대 농도값   으로 계산하는데요 여기서 왜 std 최대 농도값을 마지막에 곱하는지 궁금합니다.. 아시는 분 답변 부탁드립니다.

안녕하세요! LBIS mouse IgE ELISA kit 사용해서 mouse serum 내 IgE를 정량하려고 합니다. 우선 standard 먼저 찍어서 그래프 그린 다음 serum 농도 맞추기위해서 여러 희석배수 이용하여 실험 진행했습니다. 근데 여기서 모든 희석 배수에서 흡광도값이 standard 값을 벗어나서 희석을 더 해야하나 라고 생각을 했는데 kit 프로토콜에 이러한 내용이 있어서 질문드립니다. 프로토콜의 의미는 standard 값 안에 serum 흡광도 값을 맞춘 다음 serum 흡광도 값에 희석배수를 곱하여주어야하는 것인지  아니면 serum 흡광도 값에 희석배수 곱한 값이 standard 값 내에 있어야 하는것인지 알려주세요ㅜㅜ   희석배수가 높아질수록 buffer 사용량이 많아져서 buffer가 부족할것같아서 잠시 실험을 멈춘 상태입니다.   standard 값은 프로토콜과 유사한 값이 나왔습니다!!   프로토콜의 standard 입니다!   답변 부탁드려요!!!

안녕하세요. 이번에 ELISA 실험을 하게 됐는데   실험시간 때문에 질문드립니다.   sample 희석과 plate loading을 합쳐서 27분 정도 이내에 끝내야 하는데요.(96well 꽉 채워서)   sample 희석은 13분 대정도로 괜찮은데 생각보다 loading에서 시간이 많이 걸리네요..( loading할 때 파이페팅을 너무 느리게 하는 걸까요..? )   각 sample 희석과 loading마다 vortexing 해주고 있습니다.   생물학 실험 자체가 완전 초짜여서 노하우라든지 그런 게 전혀 없습니다..!   저에게 도움을 주세요...!! 감사합니다.    

안녕하세요. ELISA 관련 질문 드립니다.   같이 실험하는 분께서 질문 하신 내용입니다.   ELISA 실험진행시 보통 1x PBS사용하는데 ...   혹시 mes buffer 로는 사용이 가능한지 질문드립니다.    혹 사용하면 안되는 이유도 설명 부탁드립니다. 

A549 cell을 IL-1b로 자극하여 elisa를 진행하였는데요,, IL-8을 SANDWICH ELISA를 진행하였을때 CELL 자극도 잘되었고 SAMPLE을 처리하였을때 유의하게 그 수치가 떨어졌는데요,, 같은 샘플로 IL-6를 ELISA를 통해 분비량을 봤을때 자극은 어느정도 되었지만 SAMPLE처리한 상층액에서 그 수치가 오히려 자극을 한 농도보다 더 높게나와서 유의성도 뜨지 않습니다,,ㅠㅠ(자극 시킨 상층액도 Cells only와 비교했을때 유의성이 뜨지않구요,,) 결과가 왜 이렇게 나온걸까요?ㅠㅠ,, 제발 도와주세요,,, STD는 잘 나왔습니다,,,,, IL-8은 키트에 상층액 샘플을 100배 희석하라고 나와있어서 희석을 했고, IL-6는 희석하란 말이 따로 명시되어있지 않아 그냥 했었다가 너무 높게 나와서 똑같은 회사 제품이라 100배 희석했다가 다시 TEST후에 5배 희석을 진행했습니다,,,,

위는 참고한 COVID-19 진단키트에 사용되는 ELISA 방법 원리입니다.   이처럼 특정 감염병에 대한 실험으로 ELISA를 진행해야 합니다. direct나 indirect 방법처럼 membrane에 Ag를 까는 방법과 sandwich나 competive처럼 capture antibodt를 까는 방법이 있는 것으로 아는데   헷갈리는 부분이 human에 대한 질병의 경우  chicken, mouse, rabbit, pig, goat 등 타 동물에서 얻은 Ag이나 Ab를 사용하는 것으로 아는데 1. 타 동물에서 얻은 것을 사용하는 목적과 2. 가장 대표적으로 많이 사용하는 Ag나 Ab가 무엇인가요??

제목 그대로인데요 0.1 ml 전혈 (어류로부터 체혈)에서 혈장 분리 가능할까요? 현재 다양한 방법으로 시도해보고 있으나 젤리가 생긴다거나 혈장이 붉다거나 둘 중에 하나이고 제대로 분리가 잘 안됩니다 도와주세요  

  Blood collection 후, plsama를 통해 ELISA를 진행했습니다.  Protocol에 나와있는대로, acylation reagent를 넣긴 했습니다....만 왜 넣는지를 이해가 안갑니다.. kit #BA E 2200 입니다.    답변 주시면 정말 감사합니다.

안녕하세요. 초보 대학원생입니다.  간단한 내용이지만 Search를 하지 못하여 질문드립니다ㅠㅠ   Microplate reader (Molecular device, #versamax)로 ELISA를 측정하고 있는데요.  기계로 측정할 때 blank 설정을 하는 방법에 있어서 궁금한 것이 있습니다.    아무것도 안들어 있는 well을 blank로 설정하는 것이 맞는건지, Standard curve에서 0ng/ml의 농도를 blank로 설정하는 것이 맞는 건지 모르겠네요.. 제가 같은 Plate에서 ELISA시 여러 조건들을 실험하기 때문에, Standard curve에서 0ng/ml의 농도를 blank로 설정하게 되면 -값이 뜨는 곳도 있어서 보통 이런 경우에는 blank를 어떻게 설정을 하시는지 궁금합니다.   

안녕하세요,, 제목 그대로 BCA나 Bradford assay 통해서 단백질 정량했는데 너무 양이 적더라구요,,  Gel에 sample loading할 때 well 당 최소 10~ 최대 30 ug의 양은 들어가야 한다고 알고 있는데 최소 10uL씩 분주할 때 well하나에 10ug씩은 턱없이 부족합니다.. 그러니까 한 well에 10 ug/10uL 로 분주하려면 1000 ug/ml의 농도인데 sample buffer와 1:1로 혼합하니까 결국 2000 ug/ml의 단백질은 필요한거 잖아요? 그런데 bradford로 정량하니까 대략 850~890 ug/ml 정도밖에 없더라구요..  이럴때 보통 어떻게 하시나요...? cell 농도를 높여서 seeding 후 회수하시나요..? 저는 permeability test 후 cell을 회수하는거라 cell회수에 최소 한달은 걸리는데 너무 암담합니다..  

  안녕하세요. 면역실험을 배우고 있는 예비대학원생입니다.   이제껏 RAW264.7 cell로 NO assay만 해봤는데, NO assay 하기 위해 100 ul를 가져올때 추가적으로 50 ul를 더 가져와서 TNF-alpha elisa kit로 처음 실험을 해보았습니다. 실험은 동봉된 프로토콜대로 진행을 했으며 450nm - 620 nm 흡광도 값으로 계산을 하려고 합니다. standard curve를 그려보니 standard에는 문제가 없고 kit에 포함된 mouse TNF-alpha control도 범위 내인 0.7 정도로 나와 측정이 잘 되었다고 생각이 됩니다. 그래서 kit의 문제는 아닌 것으로 생각이 되는데 제가 측정하고 싶은 추출물 값이 대부분 3.6 이상으로 너무 높게 측정이 되었습니다.... LPS를 처리하지 않은 건 흡광도가 0.15이며,  LPS 처리한 상층액은 3.7, 제가 positive control로 쓴 L-NAME과 농도별로 처리한 추출물도 마찬가지로 3.7 정도로 높게 측정이 되었습니다. NO assay에는 농도의존적으로 감소하는 결과를 보였는데 같은 상층액으로 실험을 해도 왜 TNF-alpha에서는 줄어들지가 않는지 궁금합니다....   추가적으로 제가 찾아보니 https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=32081&ksr=1&FindText=TNF-alpha,%20RAW264.7 글에서 겨우살이님께서 phenol red가 없는 배지를 사용했다면 가능하다고 적으셨는데 이게 혹시 문제가 될까요...? 아무래도 kit가 비싸다보니 자주 실험하기엔 저도 부담스럽고 최대한 빨리 이유를 알아서 재실험을 해보고 싶은데 지금 알고 있는 지식으로는 한계가 느껴집니다ㅠㅠㅠ   잘 아시는 분들 계시면 도움 부탁드립니다!

안녕하세요.   cusabio의 chicken Estradiol ELISA Kit를 이용하여 competitive elisa를 진행하였는데 결과에 이상이 있어 문의드립니다.   standard 0~5까지 각각의 농도가 0, 40, 100, 200, 400, 1000이라고 명시되어 있습니다.   그런데 흡광도 측정 결과가 0 ->5의 순서대로 커지는 것이 아니라 중간에 튀는 값이 있습니다.   실험에 오류가 있나싶어 다시 진행해보아도 똑같습니다.   흡광도 결과는  첫번째 했을 때 s0: 2.467 / s1: 1.538 / s2: 1.137 / s3: 0.846 / s4: 1.124 / s5: 0.648 두번째 했을 때 s0:1.541 / s1: 1.468 / s2: 1.461 / s3: 1.204 / s4: 1.288 / s5: 0.771 입니다.   1. 이와 같이 다른 standard는 값이 그나마 괜찮은 듯 싶은데 s4값만 유독 튑니다. 이유가 무엇일까요?   2. 키트를 보니 expiration date이 지났던데 그래서 그런 걸까요? 똑같은 회사의 다른 키트(progesterone, testosterone)도 기한이 지났지만 standard 결과는 특이점이 없었습니다ㅠㅠ   3. 이렇게 튀는 값을 포함하는 standard를 이용해 샘플의 농도를 측정해도 유효한 결과라고 볼 수 있을까요?   아직 실험이 익숙치 않아 피펫팅에 오류가 커서 전부 1차로 딸깍 소리가 날 때까지만 로딩했습니다.

안녕하세요.   competitive elisa kit를 이용하여 실험한 결과,  standard의 농도는 0, 0.15, 1, 5, 20, 70입니다. 흡광도는 1.050, 0.825, 0.598, 0.336, 0.219, 0.130입니다. kit 설명서에는 4-PL curve fit으로 그리던지 y축의 농도에 대해 x축의 각 standard 흡광도를 표시하여 그리라고 합니다. 데이터는 농도의 log versus 흡광도의 log를 표시함으로써 선형화될 수 있다고 합니다.   1. standard의 흡광도와 농도를 이용하여 엑셀에서 그래프를 그릴 때 지수, 선형, 로그, 다항식 중 어떤 것으로 그려야 할까요? 만약 로그로 해야 한다면 흡광도와 농도를 모두 로그형태로 바꾼 후 그려야 하나요?   2. 흡광도와 농도를 로그값으로 변경하니 대부분 샘플의 값이 음수로 바뀌고, 다항식(4차 또는 5차)로 그리면 농도 값이 터무니없이 커지거나 작아집니다..이유가 무엇일까요?   3. 유튜브에서 competitive elisa 그래프를 그릴 때 1/흡광도로 변경해서 엑셀로 그래프를 그리던데 이 방법이 맞는 건가요?  혹시 맞다면 이렇게 바꿔주는 이유는 무엇인가요?   4. 원래 reader기에서 흡광도 측정 후 농도까지 계산해주는 기계인데 실수로 인해 standard의 농도값을 잘못 입력하였습니다. 이 경우 샘플의 농도를 계산하려면 어떻게 해야할까요?   5. 마지막으로 sigmaplot 14.5를 이용하여 standard 흡광도와 농도 및 샘플의 흡광도를 통해 샘플의 농도를 구할 수 있나요? 매뉴얼을 찾아보아도 어떻게 구해야 하는지 감이 잡히지 않습니다ㅠㅠ   많은 답변 부탁드립니다..

안녕하세요. competitive ELISA kit(progesterone)를 이용하여 standard와 chicken serum으로 실험하였습니다.   그러나 standard의 농도를 잘못 표기하여 chicken serum의 농도가 부정확하여 다시 구하고자 합니다.   standard의 경우 농도 0일 때 흡광도 평균 1.050 농도 0.15일 때 흡광도 평균 0.825 농도 1일 때 흡광도 평균 0.598 농도 5일 때 흡광도 평균 0.336 농도 20일 때 흡광도 평균 0.219 농도 70일 때 흡광도 평균 0.130   이었습니다.(농도와 흡광도가 반비례하여 competitive elisa라고 생각했습니다)   이 때, 만약 chicken serum의 흡광도 평균이 0.759인 경우 농도는 어떻게 구할 수 있나요?

안녕하세요.  CUSABIO사의 kit를 이용하여 standard와 측정하고자 하는 chicken serum(Male, 1/10dilution Male, Female, 1/10dilution Female)을 이용하여 ELISA를 진행하였습니다.   참고로 sheet에 competitive enzyme immunoassay technique이라고 써있는 걸 보아 competitive ELISA로 유추하였습니다.    MPM6.exe 프로그램을 이용하여 흡광도를 측정하였으나, 실험결과를 해석하는 데 어려움이 있어 도움을 구하고자 합니다. 첨부파일 확인 부탁드립니다. 1. report 상단에 4-parameters Fit이라고 하여 나온 식은 어떻게 나오게 된 것이며, X, Y, A, B, C, D 값은 어떻게 구해진 것인지 궁금합니다.   2. chi2와 RMS는 무슨 의미인가요?   3. standard report에서 말하는 Std#, Conc, SD, %CV은 무엇인가요? 만약 %CV가 변동계수를 뜻하는 것이라면 샘플 결과에는 왜 안 나오나요?   4. data analysis report의 Conc, SD(Conc)의 의미와 구하는 방법을 알고 싶습니다.   5. 또한 앞에 (1/10)이라고 표기된 것은 1X 혈청 원액을 증류수9혈청1로 희석한 것인데 왜 dilution 한 것과 원액의 흡광도가 크게 차이나지 않는 건가요?   6. Conc에 (+)라고 뜨는 이유와 SD(Conc)에 (*)이라고 뜨는 이유가 궁금합니다.   마지막으로 원래 그래프는 샘플을 제외한 standard만 그려지는 건가요? 질문이 많아 죄송합니다.