[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
엘앤씨바이오
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
브릭이만난사람들
전체보기 안전점검 논문교환 LABox
 카테고리: 전체 > Molecular Biology-Protein > Extraction/Isolation
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
카테고리 전체보기펼치기
질문/투표/프로토콜 등록
Q. 전기영동 electrolysis 실험 오류
전기 영동실험 결과인데,  restriction enzyme digest로 plasmid ligation process를 준비하는실험입니다. 이론상 lane2 3 4(pcr1 2 RE1)에 한개의 band만 생겨야되는데, 500~650 사이 band가 자꾸 생기는데 왜이러는걸까요? 사용한 restriction enzyme은 PCR product1&2에 붙지않는 enzyme인데 결과가 자꾸 이렇게나옵니다.. lane 2 3 4는 각각 PCR product1, PCR product2, PCR product 1&2가 들어있고 같은 restriction enzyme을 사용했습니다. 제생각에는 cDNA가 supercoiled 되는현상때문에 이렇게되는게 아닌가싶은데 원래 이정도로 band가 뚜렷하게 보이나요?
회원작성글 Heatko  |  04.12
Q. human serum 농축 방법?
안녕하세요. 석사 1학기차 학생입니다. 사람 혈청을 이용하여 elisa를 하려고 하는데 target protein에 대한 민감도가 너무 낮아 한 번 농축을 시킨 후 elisa를 진행하고자 합니다. target protein의 크기는 25kDa입니다. 혈청을 농축시켜보신 분 있으신가요? 있으시다면 어떠한 방식으로 하셨나요? 검색을 하고 있는데 잘 안나오네요 ㅠㅠ
회원작성글 버들  |  04.10
Q. media 얼리기
cell에 lactogenic hormone을 induction하여 media에서 protein발현을 확인하는 실험을 할 예정입니다.   media를 회수해서 elisa실험을 먼저 진행하고 동일한 media에서 protein을 추출해 western을 진행할 예정인데요! elisa진행할 동안 media를 -80도나 -20도에 얼려놨다가 녹여서 protein추출후에 western해도 되나요?   media 얼리고 해동후에 실험해본적이 없어서 protein에 영향을 줄까봐 걱정입니다..!
회원작성글 jchjhjhk  |  04.06
Q. BCA 단백질 정량 계산.. 어떻게 하는 건가요??
이 이후에 x축에서 sample의 농도를 구하는 계산을 어떻게 하는 것인지 설명해주세요ㅜㅜ
회원작성글 dlwpRmxdls..  |  04.05
Q. OD값에 따라 발현되는 단백질차이
똑같은 단백질을 발현하는데 저번에는 600nm에서 0.6을 맞추고 단백질 발현을 했습니다. 근데 이번에 거의 0.69까지 자라서 혹시 결과가 바뀔까요? 무슨 차이가 있을까요?
회원작성글 지니25  |  03.26
Q. Thermo NE-PER kit 핵과 세포질 분리가 잘 안됩니다.
안녕하세요, 이번학기에 입학한 석사 1차 신입생입니다. 근 몇달동안 Thermo NE-PER kit를 이용하여 cell에서 세포질과 핵을 분리하는 실험을 진행중인데 분리가 잘 안됩니다ㅠㅠ 여태 cell의 컨디션과 기술적인 실수에 문제가 있다 생각하여 kit는 생각치도 못했고 buffer의 양을 조절해야겠다고 최근들어 깨달았습니다.   cell의 양이 굉장히 적어 CER1 50ul, CER2 5.5ul, NER 25ul씩 넣어주었습니다. 그러나 세포질과 핵이 잘 분리가 되지 않았고 CER2을 11ul 넣어주니 괜찮아졌습니다.  (CER2의 양을 2배로 늘린 이유는 세포막 조차 깨지지 않아 세포+핵 상태로 남아있다 생각했기때문입니다. 실제로 western 결과에서 세포질에 Histone H3가 잡혔습니다. 원래는 detergnet를 더 넣으면 핵막까지 깨져 핵과 세포질이 더 분리가 안되는게 맞지만, CER2를 줄여서 2.75ul를 넣었을때 오히려 세포질과 핵이 뒤죽박죽이었습니다.)   문제는 무조건은 아닌데 핵에서 튜블린이 잡히고 세포질에서 히스톤이 굉장히 많이 잡힐때가 있습니다ㅠㅠ 교수님 말씀으론 CER1의 양을 100ul으로 늘리고 CER2를 5.5ul 넣으라고 하시는데 CER2를 줄이는건 아닌거 같습니다,,,, 혹시 이 키트를 사용해보신분 계시다면 조언 부탁드립니다ㅠㅠ
회원작성글 신짜오  |  03.24
Q. SDS-PAGE에서 SDS의 역할 질문입니다.
안녕하세요.  SDS-PAGE 실험을 진행하며 SDS의 역할에 대해 공부를 하는 도중,   SDS : 계면 활성제로써, 단백질들을 변성한다.  두개의 아미노산 당 비특이적으로 SDS 한 분자가 붙어 아미노산 R기 들의 전하를 모두 상쇄시킴.  -> 각 단백질들은 선형의 폴리펩티드로 변성된 후, 각 폴리펩티드의 길이에 비례해 음전하를 띤 상태가 된다.    화학 지식이 좀 부족한 터라 위에 밑줄 친 부분이 이해가 잘 안가는데요. .  조금더 상세히 설명해주시면 정말 감사하겠습니다 ㅜㅜ
회원작성글 행인2  |  03.24
Q. Extraction of tissue RNA & Protein 전문 선생님들께,
과학기술분야에 종사하시는 선생님들께, 안녕하세요.  저는 이번에 과제연구원으로 새로 랩실을 꾸리고 있는 대학생입니다.  스스로 공부는 하고 있지만 모르는 부분이 많고, 새로 실험실을 거의 혼자 꾸미려다보니 막막하여 전문가분들께 의견을 여쭙고자 글을 적습니다.  저는 앞으로 실험실에서 C57BL/6 mice를 동물모델로 Tissue (Brain - Cortex, hippocampus, Kidney) 및 혈액 (Whole blood 또는 Serum, Buffy coat) qRT-PCR, ELISA, WB을 통한 생화학적 분석을 하려 합니다.  단도직입적으로, 선생님들께 여쭤보고 싶은 것은 'Extraction of tissue RNA & Protein' 부분입니다.  1. Tissue 에서 RNA 또는 Protein 을 추출하기 위해서는 조직을 파쇄하는 것이 더 효과적이라고 들었습니다. 저는 조직을 파쇄하는 방법으로 Syringe와 RIPA lysis buffer를 이용하는 방법, Bead와 PBS를 이용한 Homogenization 방법, 또는 PBS를 더한 후, Sonication 하는 방법이 있는 것으로 알고 있습니다. 실험실에서 실험방법을 재정립하는 과정에서 이 3가지 방법 중 또는 다른 방법 중 어떤 방법이 효과적일까요? 전문 선생님들께서 경제적인 측면도 고려해주셔서 의견주시면 감사하겠습니다..! 2. Tissue 파쇄 또는 균질화 후에 보관 방법은 어떻게 하시고 계신지요? (예. -20도 냉동고에서 일주일 보관, -80도 냉동고에서 1년 이상 보관) 3. Tissue 마다 RNA 또는 Protein 추출하는 방법이 다 다른가요? 아니면 동일한가요?  4. Tissue에서 Protein 추출 후에는 단백질 정량을 하려합니다. Bradford assay를 통해 정량하려하는데 괜찮을지요? 어떤 글에는 BCA assay로 보통한다는 글이 있어 여쭤봅니다.  5. 단백질 정량 후에는 ELISA, WB을 하려하는데, 실험 순서는 어떻게 진행하면 좋을지요?  구체적으로 설명해주시거나 상세히 도움주실 선생님들.. 쪽지나 답변 꼭 부탁드립니다..!  제 글 읽어주셔서 감사합니다.  실험 초보 좀 도와주십시오.
회원작성글 21cbnuEM  |  03.23
Q. DMSO 제거
안녕하세요. 초보적인 질문 한가지 드리려 합니다. 현재 대략 15% DMSO에 녹아있는 Protein에서 DMSO를 제거하고 싶은데 lyophilize 는 너무 오래 걸릴 것 같아서 다른 방법을 생각 중인데 GPC로는 제거가 불가능 한가요? 아니면 다른 column을 이용해야 하나요? DMSO를 효율적으로 제거할 수 있는 방법 알려주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 soh0915  |  03.16
Q. nuclear extract 진행 후 western blot 혹은 NFkB p65 activation assay
안녕하세요 석사과정을 진행중인 학생입니다.   nuclear protein extract를 진행하여 NF-kB p65 activation assay 와 western blot을 진행하고자 합니다. 저희 연구실에서는 active motif에 nuclear extract kit (cat#40010)을 사용하고 있는데 마지막 단계까지 진행 후에 LSB (Laemmli sample buffer) 를 넣고  boiling 을 진행한 후 상층액을 통해 NF-kB p65 activation assay 와 western blot을 진행하면 되는것인지 질문드립니다. 혹은 LSB (Laemmli sample buffer)를 넣지않고 protocol 마지막 단계에서 단백질 정량 후 western blot 혹은 NF-kB p65 activation assay를 바로 진행하면 되는것인가요?   추가로  만약 LSB (Laemmli sample buffer)를 넣지않고 진행하는 것이 맞다면 active motif에 nuclear extract kit (cat#40010)가 아닌 NE-PER Nuclear and cytoplasmic extraction reagents (cat#78835)도 LSB (Laemmli sample buffer)를 넣지않고 단백질정량 후 바로 western blot 혹은 NF-kB p65 activation assay 를 진행하면 되는것인가요?     답변 부탁드립니다..
회원작성글 당나귀  |  03.15
Q. 콜라겐 추출에 관하여...(엘피스, 안재진, 강시 선생님 살려주세요)
안녕하세요.   글을 자주 올리게 되네요. 선배님들의 조언이 실험을 하는데 많은 도움이 되어 자주 찾아뵙게 되는 것 같습니다.   오늘은 세가지 질문을 드리고 싶습니다.   1. 저는 펩신 가용화 콜라겐 추출 실험을 현재하고 있습니다. 0.5M acetic acid에 pepsin을 함께하여 교반 후 원심분리하여 얻은 상층액을 염침전시켜 투석을 하고 있습니다. 근데 아세트산을 투석외액으로 사용하기 이전에 Na2HPO4를 투석외액으로 먼저 사용하던데, 그 이유가 펩신을 불활성화 시키기 위함이라고 알게 되었습니다. 제가 알고 있는 것이 맞는지, 맞다면 간단하게 원리를 설명해주시면 감사할것 같습니다.   2. 1번에서 투석 및 동결건조까지하여 얻은 콜라겐을 물에 녹였는데 잘 녹지 않았습니다. 제가 샘플을 녹인 용액은 아세트산을 사용하였는데 아세트산에 녹여서 전기영동을 해야하는지, 아니면 에탄올이나 DMSO에 녹여서 전기영동에 사용하여야 하는지 궁금합니다.   3. sds page용 단백질 샘플을 만들 때 샘플버퍼를 넣고 폴리펩타이드를 선형으로 만들어주기 위해 95도에서 약 5분간 반응시키는걸로 알고 있습니다. 콜라겐은 열변성에 특히 취약해서 실험을 저온조건에서 진행해야하는데 그러면 95도 가열도 하면 안되는지 궁금합니다. 콜라겐 단백질 추출 및 전기영동을 해보신 선배님들의 조언 기다리고 있겠습니다. 감사합니다.
회원작성글 okop311529  |  02.15
Q. NUP98과 LaminA/C의 차이?
Nuclear protein을 추출하고 나서 control로 nup98, lamin AC를 사용하는데요, 같은 세포 내에서 이 둘의 모두 사용하는 이유도 있을까요? 어떤 특성의 차이가 있는지 잘 모르겠습니다.
회원작성글 대학원생인가노예인가  |  02.08
Q. 투석과 샘플버퍼 선정기준에 관하여
저는 현재 콜라겐 단백질을 추출하려고 하는 석사과정생입니다. 참고하고 있는 논문은 NaCl로 단백질을 염침전 시킨 후, 냉증류수를 통하여 투석을 실행하라고 되어있습니다. 그런데 제가 이전에는 투석에 관하여 잘 몰라서 공부중에 있는데 투석은 보통 샘플에 들어가는 샘플버퍼와 맴브레인 외부의 투석버퍼를 이용하여 하더라구요.   그러한 기준도 단백질마다 다 다르겠지만 그러한 투석 조건을 선정하는 기준에 관한 설명이 잘 되어있는 곳이 없어서 막막한 부분이 있습니다.   염침전한 콜라겐 단백질을 그저 냉증류수로만 투석해도 괜찮을지 아니면 적적절한 버퍼를 사용해야하는지 선배님들의 많은 조언 부탁드립니다...
회원작성글 okop311529  |  02.08
Q. 코마시 염색 후 protein sequencing을 하려고 하는데요,
단백질은 SDS-PAGE 젤에 내린 후   코마시 염색 후 protein sequencing을 하려고 하는데요   타겟 밴드를 잘라낸 후,   상온 운송하나요? 아니면 ice 운송하나요?   어떤 방식이 잘 protein이 보존 되나요?   답변 주시면 감사하겠습니다.
회원작성글 꿈꿈이  |  02.03
Q. Protein prep for Western Blot 질문입니다. 너무 궁금해 미칠거같아요 ㅠㅠ
Western Blot을 위해 Protein prep을 하는 과정 중 궁금한 점이 몇 개 있어 질문드립니다. 아무리 구글링해봐도 명확한 답변이 없어 고수님들의 도움을 받고 싶습니다 ㅠㅠ    제가 사용하는 lysis buffer의 조성은 다음과 같습니다 Tris : pH 조절용 NaCl : Cl -> stacking gel에서 글라이신과 함께 같은 출발점에서  running될 수 있게 도와주는 역할 + 삼투압으로 인해 cell lysis를 일으키는데 기여  Trition X-100: ??? SDS: non-covalent bond를 끊어주고 protein에게 negative charge 부여 + 이온성 계면활성제로 세포막을 denature 시키는데 기여    제가 궁금한 점은  1. Trition은 비이온성 detergent인데 SDS와 마찬가지로 세포막을 denature 시킨다고 알고 있는데 SDS가 있는데 굳이 가져다 쓰는 이유가 무엇일까요...? 2. Lysis buffer 처리 후 vortexing을 여러번 하고 centrifuge를 돌려  supernatent를 따서 쓰는데 DNA나 RNA의 경우 (-) charge를 띄고 있을텐데 그놈들도 물에 soluable하기 때문에 centrifuge를 돌려도 물에 녹아  supernatent에 있어야하는거 아닌가요...? 왜 pallet으로 가라앉는건가요? ㅠㅠ     
회원작성글 Minuate  |  02.02
Q. AU-PAGE gel에서 얻어진 단백질
AU-PAGE gel에서 얻어진 단백질이 6X loading dye로 염색이 되어 있는데, 이것의 색을 없애려면 어떠한 과정을 거쳐야 할까요? HPLC를 진행할 예정입니다.
회원작성글 택운자몽  |  01.27
이전  1 02 03 04 05 06 07 08 09 10  다음
공지사항
2020년 실험 Q&A 우수 참여자 선정 안내.
2019년 실험Q&A 우수답변자 안내
실험Q&A 게시판 편집기 변경
실험관련연재
박은총 연재중후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
Mr.S 연재중의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재중실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
이제욱 연재중생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
금주의 인기Q&A
ELISA 실험시 이제품 무엇인지 아시는분 [3]
Western blot 실험관련 문의 드립니다. [4]
웨스턴 관련 질문입니다 [5]
단백질 전기영동 왜 이렇게 뭉친 것처럼 나오나요ㅠㅠ [3]
약재 열수추출법 [4]
standard curve 관련 질문입니다. [5]
전기영동 결과 분석 [1]
Stock 처리 시 셀 죽음 [2]
전기영동 electrolysis 실험 오류 [7]
전기영동 agarose gel 하얀 잡 먼지가 안없어집니다 [4]
최근답변자 우수답변자
알웆우

대왕개구리SPEED

알Grooot

올챙이ArenaNova

대왕개구리강시

알Heatko

알과알못

알팬더판

대왕개구리강시

대왕개구리안재진

꽃개구리visavis

개구리bio

개구리secu

개구리식스센스

개구리미맹

개구리곰돌2

위로가기
실험 홈  |  실험FAQ  |  실험 문의 및 제안
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의 member@ibric.org
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
진스크립트 광고