[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
한국애질런트
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 정래동 교수
전체보기 안전점검 LABox
 카테고리: 전체 > Molecular Biology-RNA
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
Cell Biology Microbiology Plant Biology Laboratory Animals
Omics Chemical biology Bioinformatics Laboratory Equipments
Buffer/Reagent Bioethics Etc.
카테고리 전체보기펼치기
질문/투표/프로토콜 등록
Q. RNA 전기영동
rRNA 추출 후 전기영동을 하였는데 밴드 퀄리티가 이렇게 나오게 되었습니다. 겔 조성은 2%로 조금 높게 만들긴 했는데 Smear되서 밴드가 나왔네요. 이정도로 cDNA 합성후 PCR을 진행해도 될까요...? ㅠㅠ
회원작성글 임노코  |  08.16
Q. Elution buffer로서의 RNase-free water 역할
안녕하세요 제가 QIAGEN의 RNeasy Plus Mini Kit라고 RNA prep, RNA isolation을 위한 kit를 사용중입니다. Kit 안에 포함되어있는 여러 buffer들의 원리를 찾아보고 있었는데, 최종단계에서 elution buffer로 사용되는 RNase-free water가 어떠한 원리로 Pure RNA를 얻게 도와주는지 궁금해서 질문드립니다. 감사합니다.
회원작성글 Foxcatcher  |  08.11
Q. RNA Isolation 하고 nano drop을 찍으면 항상 농도가 적게나와요
안녕하세요! 현재 RT-PCR을 배우고 있는 학생입니다. 다름이 아니라 RNA를 추출하고, Nano drop을 찍으면 항상 Nucleic acid conc가 적게 나와서 고민입니다.. 평균적으로 50ng/ul이 나오는 것 같은데 혹시 이런 상황일 때 RNA 추출에서 주의해야할 점이 있을까요? 프로토콜 그대로 하고있다고 생각하는데 항상 이 값이 적게나와 다음 cDNA 합성 단계를 진행하지 못하고 있습니다 ㅜㅜ.. 마지막 단계에서 원심분리를 하면 펠렛이 Ep tube에 확실히 보이긴 하는데 나노드롭만 찍으면 값이 낮게 나오더라구요 Trizol에서 세포를 강하게 피펫팅 하는 과정에서 기포가 많이 생겨서 그런건지 아니면 Trizol에서 너무 오래 처리를 해서 그러는지 ㅜㅜ 혹시 조언좀 구할 수 있을까요? 
회원작성글 공공펄  |  08.09
Q. sequencing 시 data가 깨끗하게 나오지 않아요
  SARS-CoV-2의 spike protien을 Sanger sequencing을 통해 확인하고 있습니다.    one step RT-PCR kit(HyQ One step RT-PCR kit)를 이용해 cDNA 합성과 PCR까지 한번에 진행하고 있고, 전기영동 상에서 band가 뜨는 것을 확인 후sequencing을 업체에 의뢰하고 있습니다.    그런데 결과를 받아보면 여러개 sample 중 한두개씩 결과가 좋지 않네요ㅜㅜ    아래와 같이 comment를 받았습니다.    실험실에서 확인했을 때는 아래와 같이 band가 명확하게 확인되어 의뢰했는데 왜그럴까요..? (영동 사진의 4,5번이 sequencing 결과가 나오지 않았고, 나머지 sample은 sequencing 결과를 받았습니다.)      각각의 sample은 CT값을 기준으로 비슷한 정도의 것입니다.    10개 정도의 sample에서 한두개가 이렇게 튀니 속상하네요ㅜ   생각해볼 수 있는 원인이 뭐가 있을지 궁금합니다.
회원작성글 타코  |  08.04
Q. cell seeding 15시간후 starvation
RNA extracion을 하기위해 6well plate에 시딩을 하였습니다. 시간이 없어서 빨리빨리하려는 마음에 셀 수를 많이 시딩하였고 15시간만에 70~80% 차서 starvation을 하였습니다.  seeding후 24시간뒤에 starvation하는 것과 15시간뒤에 starvation하는 것에 차이가 있나요? 저희는 starvation은 12시간하고 treatment는 24시간합니다.
회원작성글 oneday  |  07.28
Q. qPCR결과와 RNA in situ 결과가 달라요..
안녕하세요. 저는 석사 과정 1학기 차 학생입니다. 저는 qPCR과 RNA in situ를 통해 mRNA level을 확인 중인데요, 둘의 결과가 다르게 나와 혼돈스러운 상태입니다. qPCR을 하기 위해 RNA extration 과정에서 실수가 있나 싶어 2번이나 새로 뽑아보고, primer도 sequence를 달리하여 여러 primer을 사용해보았는데도 RNA in situ 와 결과가 다릅니다 ㅠ  in situ probe의 양도 희석을 다양하게 하여 진행해보았지만 여전히 둘의 경향이 너무 달라 혼란스럽습니다.. 이러한 경험을 하신 분이 계실까요? 계시다면 조언 부탁드립니다!!ㅠㅠ 감사합니다~
회원작성글 도오비  |  07.26
Q. RNA 추출
석사 1년차 왕초보 실험자 입니다 ㅠㅠ 넙치 간에서 RNA 분리를 실시 하고 gDNA를 제거하는 과정후 전기영동 결과 입니다. 일단 결과는 RNA가 거의 다 분해되어 버렸다고 볼수 있는데 cDNA 합성 과정으로 넘어가면 안되고 다시 실시하는게 맞는 거겠죠...? gel 조성은 1%입니다. (첫번째 로딩은 DNA 마커로 그냥 한번 넣어본거라 무시하셔도 됩니다)
회원작성글 임노코  |  07.22
Q. cDNA 합성과정에서 RNA 농도비에 대한 질문입니다!
cDNA 합성 과정에서 RNA 순도 측정시  260 nm/280 nm ratio는 1.8~2.0, 260 nm/230 nm ratio는 2.0~2.2이 적당한것으로 알고있는데 저는 RNA 순도 측정시 두 비율 다 2.0~2.3 정도의 값이 나옵니다. 260/230 ratio는 적당한것 같은데 260/280 ratio는 2.0을 넘어도 괜찮은 값일까요?  비율이 낮으면 오염인것으로 알고있는데 더 높아져도 오염일까요??
회원작성글 jineee  |  07.19
Q. Primer 농도계산 첨부파일
Primer foward 293ul를 넣으면100uM이 되는데 10p mol농도로 만들어 주려면 몇배를 희석해야하나요? 293ul넣은후 100uM이 되면 1000배희석후 100nM이되고 난 후 100배 희석후 10pM로 만들어 주어야하는건가요? 아님 제품이 25nmol에서 10pmol로 만들어주려면 ->25000/10해서 2500ul넣어주면 10pM이 되는건가요?
회원작성글 sh1227  |  07.19
Q. DNase I treatment protocol 한번 봐주세요ㅠㅠ
실험실에서 이렇게 배워서 저는 이런 방법으로 DNase I을 처리했거든요. 근데.. 사용하는 DNase I (takara)의 protocol을 보면 제가 하는것과 protocol이 다르고, 또 저는 RNA 농도말고 volume으로 맞춰서 넣는데 이렇게 해도 되는건가요?? 위의 언급한 방식으로 DNase I을 처리하고 실험했을때 큰 문제가 없었고 DNA 분해가 되는 것 같습니다만...ㅠㅠ 틀린 protocol이라면 말씀 부탁드립니다.ㅠㅠ 
회원작성글 soor  |  07.18
Q. cDNA로 pcr진행하기전에 왜-70℃로 boliling해주나요?
안녕하세요 선배님들 cDNA합성이 제목과같이 왜저렇게 보일링해주는이유가궁금합니다 ㅠㅠㅠㅠ 
회원작성글 choheec  |  07.18
Q. RT-PCR) 특정 primer에서만 smearing 현상
안녕하세요! RT-PCR 진행중에 있습니다. RNA 순도 2.0으로 잘 뽑았구요 housekeeping gene도 one-band 확인했습니다. 다른 프라이머에 대한 밴드도 예쁘게 잘 뜨고 있는데 유독 하나의 프라이머에서만 끌림 현상이 보이고 있습니다. D.W 갈고 새로 만들어서 써보고도 있는데 완전히 잡히지 않습니다. template 문제이거나 PCR 시약 문제라 생각하기에도 다른 프라이머에서 잘 나오고 있고, 다른 실험자한테는 깔끔하게 나오고 있습니다. 결국 제 손의 문제인가 싶다가도 그 프라이머만 유독 그러니 혼란스럽네요... 혹시 제가 놓친 무언가가 있을까요? 주의점이라던지..부탁드리겠습니다! 감사합니다.  
회원작성글 뽀작  |  07.15
Q. 식물 바이러스 검정 첨부파일
식물 잎에서 rna추출후 바이러스 혼합 믹스프라이머로 pcr후 전기영동을 하였습니다 전기영동결과 밴드가 너무 끌리고 시료 로딩홀에서도 마커가 같이 나오고 있습니다 6번째 시료의 경우는 추출 자체가 안된것 같기도 하고요. 이분야 전공자가 아니다보니 원인이 너무 다양해서 어느 부분부터 손을 대야할지 좀 막막하네요
회원작성글 삼령이요  |  07.15
Q. CRISPR Cas9 haplotype cDNA PCR
human APC유전자를 CRISPR Cas9을 하여  haplotype의 gene editing clone을 얻었습니다. 이렇게 했을 때, exon2가 skipping 될 것이라는 예측을 기반으로 RNA에서 cDNA를 만들어 target seq PCR하여 sanger를 돌렸는데 control과 차이가 나지 않습니다. skipping이 안된 것일까요? 아니면 haplo로 되어서 minor peak이 묻힌걸까요? 이런 경우 어떤식으로 splicing varient를 확인할 수 있을까요?
회원작성글 새슬  |  07.14
Q. shRNA
shRNA cloning 된 것을 주문해서 받아서 cell에 Transfection을 하였어요. qPCR을 돌려서 control하고 비교했을 때에, 발현이 줄지 않고 약간 과발현 된 듯이 나와서요.  PCR하는 primer를 새로 짜야하나 확인하면서, shRNA 서열 위치를 확인했어요.   coding sequence (CDS) 뒷부분에 shRNA 서열이 짜여져 있더라구요. 나름 TATA box를 포함하는데, 앞 부분이 조절하는 부분으로 배웠던 것 같아서;; 뒷 부분에 서열로 인식해서 조절하는지 궁금해요.     
회원작성글 clickclick  |  07.14
Q. cDNA 합성과정에서 RNA 농도에 대한 질문입니다!
안녕하세요! 현재 대학원생 입니다 cell trizol처리 후 cDNA 합성 과정에서 RNA 농도 측정결과 seeding에서 문제가 없었다면 모든 군에서 비슷한 정도의 농도가 측정되어야한다고 생각했는데 이번 RNA 농도 측정 결과 한 sample 군에서만 다른 군들보다 평균 100정도 낮은 농도로 측정되었습니다. 다른 군들은 3-400정도로 농도가 측정되었고 한 sample군만 200대에서 농도가 측정되었는데 이 경우 세포 독성으로 인해 세포가 죽어서 그런것일까요..? 한 군당 n수 4로 진행하였는데 4개 모두 200대에서 측정되어서 RNA 추출 과정에서 실수가 있다기보단 세포에서 문제가 있을것같다고 생각되는데 맞는지 궁금해서 질문합니다 세포 trizol 처리 전 눈으로 세포 관찰 시 세포 뜬 정도가 다 비슷했고 부착된 세포들의 상태가 괜찮아서 뒷단계로 실험 진행했습니다!
회원작성글 jineee  |  07.14
이전  1 02 03 04 05 06 07 08 09 10  다음
공지사항
2020년 실험 Q&A 우수 참여자 선정 안내.
실험Q&A 게시판 편집기 변경
실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
금주의 인기Q&A
Bradford Protein 단백질 정량하는법 [15]
실험용 항우울제 구매 방법 [1]
cell differentiation media change cell l... [1]
전기영동 loading dye [5]
초파리 무게가 궁금합니다. [1]
western blot 밴드가 점묘화처럼 찍혀나오는 문제 [2]
갑자기 생장이 느려진 박테리아......왜그럴까요ㅠ [2]
PCR 관련 조언 부탁드립니다. [4]
real time pcr ct값이 이상합니다 도와주세요 [3]
agar 배지 냉장보관 어떻게 하는게 맞나요? [3]
최근답변자 우수답변자
올챙이CD4+T

대왕개구리SPEED

알라뛔한

앞다리oneday

알롤로야놀자

알살려주세요

올챙이PORI

알실험알못

꽃개구리Kozmoj

꽃개구리개그

개구리미맹

대왕개구리엘피스

꽃개구리Jake

개구리별숲

개구리빛초롱

개구리하늘을달려라

위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
써모피셔사이언티픽 광고