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 카테고리: 전체 > Molecular Biology-DNA > etc.
Mol. Biol.-DNA Mol. Biol.-RNA Mol. Biol.-Protein Immunology
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Buffer/Reagent Bioethics Etc.
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질문/투표/프로토콜 등록
Q. 0.5M EDTA 10µL 제조법
시약 제조법에 대해 공부를 하고 있는데, 0.5M EDTA 10µL의 제조법이 궁금합니다.
회원작성글 JHS3219  |  09.16
Q. 1M Tris-HCl(pH8.5-8.8) 180µL 제조 방법
1M Tris-HCl(pH8.5-8.8) 180µL에서 pH가 8.5-8.8인데 여기서 HCI을 몇 mL를 넣어줘야 하는지 궁금합니다.ㅠㅡㅠ 
회원작성글 JHS3219  |  09.15
Q. 10% SDS 20µL 시약 제조법을 모르겠어요
이번에 실험을 하게 되어서 10% SDS 20µL의 시약 제조법을 알아야 하는데 관련 내용을 찾기가 힘들어서 이 제조법에 대해 아시는 분들 답변 부탁드립니다. ㅠㅡㅠ 
회원작성글 JHS3219  |  09.15
Q. 1M Tris-HCl 제조 방법
제가 시약 제조법에 대해 배우고 있는 중인데 1M Tris-HCl(pH8.5-8.8) 180µL의 제조법에 대한 정보를 알고 싶습니다.
회원작성글 JHS3219  |  09.14
Q. DNA복제를 추적할 때 BrdUTP 대신 BrdU를 쓰는 이유가 무엇인가요?
BrdU는 nucleoside인데 왜 nucleotide형태인 BrdUTP형태로 안쓰고 BrdU를 넣어줘서 세포내에서 BrdUTP가 되게해서 쓰는건가요?  도파민이 BBB를 통과하지 못해 L-도파를 넣어주는 경우와 같은 이유에서인가요? 아니면 tri phosphate이 붙으면서 negative charge에 의한 membrane 투과성 문제일까요..? 너무 궁금합니다 
회원작성글 포차코  |  09.13
Q. 유전 형질 비율 관련 질문
안녕하세요. 생명 관련 자율동아리 하고 있는 중3인데요. 제가 이번에 친구들이랑 비멘델 유전 가지고 파이썬으로 시뮬레이션을 만들어서 복대립 유전이나 중간유전 같은 것들을 구현했는데, 시뮬레이션의 결과가 어느 정도 정확한지 알고 싶어서요. 예를 들어서 완두콩의 유전형질 비율은 멘델이 실험을 했었어서 1:2:1인 게 널리 알려져 있잖아요. 근데 초파리 눈 색이라던지, 나팔꽃의 엽형과 같은 형질은 인터넷에서 제 수준으로는 형질 간의 비율이 대략 어떠한지에 대한 연구결과를 찾기가 어려워서요. 어떻게 찾을 수 있을까요?
회원작성글 e3s  |  09.07
Q. 항암제 동물실험 시 동물 종류에 따라 결과가 달라질까요
항암제 동물실험 시 사람과 99% 유전자가 비슷한 쥐를 사용한다고 알고 있습니다. 종양억제유전자 발현을 막는 물질의 억제물질을 이용해 개발된 항암제는 종양억제유전자의 서열이 다른 종으로 실험할 경우 결과가 달라질까요?? CDH1 종양억제유전자요! 여러 종에 존재하는데 서열이 다르니까 결과가 달라질까요ㅠㅠ
회원작성글 <(^오^)>??  |  09.05
Q. UCSC genome browser에서 promoter 열람시 궁금한 점이 있습니다.
안녕하세요. 매번 질문만 드리게 되는군요 ㅠㅠ 항상 큰 도움 주시는 많은 선배님들께 감사드립니다. 저의 연구의 일환으로 UCSC genome browser를 통해 mouse IRF8 gene의 promoter sequence를 열람하고 있습니다. 질문은 다음과 같습니다. 아래 그림에서 "Promoters from EPDnew mouse version 001"라고 적힌 부분 밑에 두꺼운 파란색 선으로 promoter에 해당하는 region이 표시되어 있는데요, 조금 더 두껍고, >>>>> 무늬가 표시된 부분이 존재합니다. 혹시 저 부분이 실제로 transcription이 시작되는 지점이고, 그 부분의 시작점이 TSS (Transcription Start Site)인지 궁금합니다.     제가 요즘 긴 슬럼프를 통과하고 있어서 사소한 것 하나도 자신감이 없고 불안하고 그렇습니다.. 참 간단한 내용이고 분자생물학 교과서를 보면 제 생각이 맞는 것 같긴 한데 선배님들께 한 번 더 확실하게 확인을 받고 싶은 마음입니다.   답변 주시면 정말 큰 용기가 될 것 같습니다. 감사합니다!!
회원작성글 크리스12  |  09.02
Q. plant DNA 추출 후 장기 보관 방법
안녕하세요 Plant DNA를 추출하여 약 2주 정도 되었는데요. 당분간 사용하지 않을 것 같아서 보관을 하고자 하는데 다들 어떻게 보관하는지 궁금하여 이렇게 글 남깁니다.  현재 DNA의 경우 KIT에 있는 elution buffer에 녹아 있는 상태이며, 냉장(2-4℃) 보관 중 입니다.  따로 추가적인 buffer 없이 바로 냉동으로 보관해두 괜찮을까요?  대략 한 달간 사용을 안할 것 같습니다.    
회원작성글 해조칼슘풍덩  |  09.01
Q. size가 큰 플라스미드 전기영동 방법
안녕하세요, 실험을 배워나가고 있는 학부생입니다. cloning과 관련해서 이곳에 몇 번 질문을 남긴 적이 있었는데, 마침내 cloning이 최종적으로 성공한 것 같습니다. 그런데, insert1은 sequencing을 통해 삽입하였지만 insert2는 확인하지 못해 확인 과정이 필요합니다. 이를 위해서 원래는 colony PCR이나 제한효소 처리를 통해 insert가 분리되는지 관찰하고 있습니다. 그런데 이번에는 처음 vector에도 같은 항생제 저항 유전자가 들어있고, 또 무엇보다 형질전환 colony가 너무 많이 떠 제가 찾는 플라스미드를 찾는데 시간이 많이 소요될 듯 합니다. 그래서 size로 1차적으로 거르기 위해 전기영동을 하려 하였는데, 실험실에 계시는 분이 알려주시기로 저희 실험실 전기영동 기계는 5000bp이상의 플라스미드는 잘 분리가 되지 않는다고 합니다. 전기영동의 원리를 생각해보면 agarose gel의 농도를 높이면 괜찮을 것 같은데, 제 생각이 맞을까요? 아니면 혹시 제가 선택할 수 있는 다른 방법이 있을까요?
회원작성글 qkqh1  |  08.24
Q. PCR 실험에서의 물리학
PCR 실험에서 찾을 수 있는 물리학이 있을까요?
회원작성글 밍은  |  08.22
Q. confocal시 fam 관찰
안녕하세요 5'-6-FAM(fluorescein amidite)가 결합된 antisense oligonucleotides를 mouse injection하고 target organ을 whole mount dissection으로 slide 제작하고 target cell에 antisense oligonucleotides가 들어갔는지 confocal로 확인하는 실험을 하고있습니다 염색은 DAPI, Phalloidin(actin염색, alexa fluro 647)로하고 dapi, 647, fam 채널로 찍고있습니다 문제는 injection시행하지않은 control slide에서도 fam signal이 상당히 나와서 실험군의 signal이 신뢰할만한 것인지 의문이 듭니다 control slide의 형광이 보이지않을 정도의 confocal setting에서 실험군 촬영하는 것 외에 혹시 다른 방법이 있을지요? 아니면 FAM에대한 antibody를 써보신 분이 있으신지 궁금합니다. 감사합니다
회원작성글 tkdnsel  |  08.09
Q. CRISPR/Cas12a 반응을 위한 시약 조성비에 관한 질문입니다. 첨부파일
한 논문에서 본 실험의 시약 조성비입니다   해당 논문에선 200nM Lba Cas12a, 1uM crRNA, NEBuffer 2.5 ul, 20U RRI, RPA product9(dsDNA) 2ul, 800 nM fluorophore quencher labeled ssDNA probe로 reaction volume은 25 ul 이라고 하였습니다.    실험 초보여서 이렇게 쓰여있어 어떻게 넣어야 할 지 의문입니다.   동일한 Lba Cas12a을 찾아보니 stock의 concentration이 1uM인데 그렇다면 Lba Cas12a를 5ul 넣어 200nM 을 넣으면 되는 것 인가요? total volume은 25 ul 이기에 1/5인 5ul를 넣어서요.    RRI의 양과 논문과 같은 Probe를 사용한다면 고정적인 수치일것이고  그렇다면 만약 다른 crRNA를 사용하고자 한다면 그 crRNA의 농도에 따라 reaction volume 도 달라지는 것 아닌가요?    사진은 논문 원문입니다.    감사합니다. 
회원작성글 자가격리  |  08.09
Q. CRISPR Cas9 knock-out 후 gene 도입 관련 질문드립니다.
안녕하세요, Crispr Cas9 knock-out 시스템을 랩에 구축하려 공부중인 대학원생입니다. 궁금한 점이 있어 질문드립니다.   guideRNA는 shRNA와는 다르게 반드시 CDS만을 target해야 하는 것으로 이해했습니다.   Cas9과 gRNA를 expression하는 vector를 transfection하는 system으로 knock out을 진행하고자 하는데요, 이를 통해 knock out이 발생한 cell에서는 Cas9과 target의 CDS에 대한 gRNA가 계속 발현하게 될텐데,   이 cell에 만약 WT 혹은 mutant의 target gene을 plasmid를 통해 도입시켜 준다면, 도입시켜준 gene에 대한 knock out도 발생하게 될것으로 예상되는데, 실제로 그러한지 궁금합니다. 제가 이해한 바가 맞는지...   그리고 이러한 현상을 피하기 위해서 반드시 doxycyclin-dependent하게 발현하는 cas9과 같은 제품을 사용해야 하는지도 알고 싶습니다.
회원작성글 웨스턴공장매니저  |  08.02
Q. facs 실험에서 휘발성물질 사용 하는법
facs실험을 할때 휘발성 물질(beta-mercaptoethanol)이 들어간 샘플을 측정하고 싶은데 기계안에 휘발성 물질이 들어가면 부식시킬수 있어서 사용하지 말라고 들은적이 있습니다.   그런데 많은 논문에서 휘발성 물질이 들어간 버퍼를 이용해서 샘플을 많이 찍었습니다.   어떻게 논문을 따라서 휘발성물질이 들어간 샘플을 facs로 분석할수 있을까요?
회원작성글 오르골  |  07.27
Q. RT-qPCR 시 비교군 설정
동물 조직에서 RNA를 isolation후에 cDNA 합성까지 하였습니다 ct값 비교를 위해 rt-qpcr을 해야돼는데 비교군을 R-, R+, RNA로 설정(중합효소의 유무와 cDNA를 대신하여 RNA로 mater mix 제조)하였고 프라이머(NTC, gapdh를 사용) 비교한 결과 R+에서 ct값이 15~16이 나왔고 나머지 R-, RNA에서 31~32의 값이 나왔습니다. 이론상  R-, RNA에서 증폭되지 않는 값이 나오거나 높은값이 나오도록 하는것이 옳바른 실험의 결과인데 굳이 비교군을 R-, R+ 여기에 RNA까지 설정하는 이유가 무엇인지 궁금합니다. 아직 배우고있는 입장이라 질문자체에서 오류가 있을수도있지만.. 혹시 이해하셨다면 답변 부탁드립니다. 
회원작성글 anbound  |  07.26
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