본 발표에서는 인간 iPSC 유래 세포가 분비하는 **개별 세포외소포(EV)**에 포함된 **액틴(actin) 화물(cargo)**을 정량화하기 위한 2색 단일분자 형광 분석 전략을 소개합니다. **형광 교차상관분광법(FCCS)**과 **동시 형광 버스트 분석(coincident fluorescence-burst analysis)**을 결합함으로써, 자유롭게 존재하는 형광 배경 신호로부터 실제 화물을 탑재한 EV 신호를 신뢰성 있게 구분할 수 있습니다. 이를 통해 액틴 양성 EV의 비율을 측정하고, 단일 소포 수준에서 EV당 액틴 분자 수를 추정하며, 또한 화물 탑재 EV 이벤트 발생률을 분비 동역학(secretion dynamics)을 반영하는 지표로 추적할 수 있습니다. 이 방법을 적용한 결과, 부분 분화(partial differentiation) 및 아밀로이드-β 노출과 같은 스트레스 유사 조건에서 **미분화 상태(undifferentiation)**에 비해 액틴을 탑재한 EV 이벤트가 증가함을 확인하였으며, 이는 세포 상태가 세포골격 관련 화물의 EV 포장(cargo packaging)에 영향을 미침을 시사합니다. 종합적으로 본 플랫폼은 EV 화물을 통해 **세포골격 교란(cytoskeletal disruption)**을 정량적이고 높은 특이도로 모니터링할 수 있는 도구를 제공하며, 향후 신경계 질환의 진단 및 치료 연구를 지원하는 기반 기술로 활용될 수 있습니다.