싱글크로스오버의 매커니즘 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q 싱글크로스오버의 매커니즘

레벨01 봉포비 (대학생)

gdna상에 플라스미드의 homologous recombination을 유도하는 과정입니다.

L,R은 각각 ( left arm , right arm)을 의미합니다.

Left arm에서 통합된다고 가정했을 때 single cross over가 일어났는지 confirm하기 위해서 pcr로 증폭 하려하는데요,

1번(검은색)으로 표기된 프라이머 세트가 맞는 것인지, 2번(빨간색)으로 표시된 프라이머 세트가 맞는것인지 모르겠습니다.

벡터 시퀀스를 포함하는 2번(빨간색 프라이머)세트를 선택해야 LA에서 싱글 크로스오버가 유도되었을 때 검증이 가능한 것 같다고 생각하는데 맞나요?

한번만 알려주세요... 부탁입니다 ㅠㅠ.

Cell Biology > Transfection

A 답변 1

Single crossover는 항생제 selection으로 유도하는 것으로 알고 있습니다.

물론 그렇게 하셨겠지만, 결과 확인을 위해 gDNA를 뽑아 PCR로 확인할 필요는 없을 것 같아요.

1차 selection이 끝났으면, 바로 double crossover 유도하시고 최종 얻은 gDNA를 upstream forward+downstream reverse로 PCR 해보세요~

Gene knockout 또는 I 유전자 치환이면, 최종 결과를 PCR로 증폭해서 대조군과 비교하면 될 것 같아요.

암튼 결론은 항생제 내성 갖고 있으면 single crossover는 성공.

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(일반인)

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