밴드는 해당사이즈에 예쁘게 나오것을 확인하였고, pcr product 로 exon 별 길이 500bp 사이즈의 sequencing 을 하려고 하는데 No signal로 sequencing 이 되지 않네요..BigDye Terminator v3.1 seq kit 사용하였고, protocol 대로 진행하였으나, 전혀 signal이 없습니다.
조건은 다음과 같습니다.
BigDye 0.5ul
Foward primer (3.2pmol) 1ul
Reverse primer (3.2pmol) 1ul
Template 1ul(30ng)
buffer 3.5ul
DW 4ul
Template 양을 100ng/200ng /300ng 으로도 늘려보고, bigDye 비율도 늘려보았으나, 전혀 되지 않습니다.
Template 사이즈가 너무 커서 그런걸까요? purification은 Nimagen ex'pure로 하였습니다.
1k bp 정도는 항상 해오던 거라 문제없이 잘될거라 생각 했는데 전혀 되지 않아 뭐가 문제인지 모르겠습니다.
