지방조직에서 분리한 세포 동결 방법 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q 지방조직에서 분리한 세포 동결 방법

레벨01 우우리 (대학원생)

24.10.16 18:52
조회1784

안녕하세요.

마우스 지방 조직 세포에 관련해서 궁금한게 있어서 올렸습니다!

지방조직에서 SVF cell이랑 primary adipocytes를 분리하여 primary cell culture를 하고 싶어서 혼자 세팅하려고 하는데요

도저히 혼자 힘으로는 불가능하다고 느껴서....세포 분리 후 보관만이라도 하고 싶은데...

논문을 봐도 솔직히 어떻게 해야할지 잘 모르겠고 주변 선생님들한테 여쭤보자니 이 분야에 대해 아시는 분이 한 분도 안계시는 상황이예요..ㅠㅠ

혹시 방법 아시는 선생님 계실까요..? 사실 분리도 잘 모르겠지만요...ㅠㅠ

쓰다보니까 너무 서럽네요.

도움 부탁드립니다.

Cell Biology > Cell Culture

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A 답변 5

채택된 답변입니다.
레벨05 BlackSmile (과기인)
24.10.17 16:07

Cell isolation 부터 guide가 필요하신 건가요? 아니면 Storage만 해결되면 되는 상황일까요?

답변리플

레벨01 우우리 (대학원생)
24.10.18 10:21
질문자

사실 cell isolation부터 필요할거 같습니다..소화제? 넣고 하는건 무슨 말인지 알겠는데 스톡 메디아를 뭐를 넣고 해야하는건지..잘 모르겠습니다..;;ㅎㅎ 종류가 너무 많아서 그냥 기본 구매했는데 이것도 아닌거 같아서요..

레벨05 BlackSmile (과기인)
24.10.18 11:28

1. 현재 구매한 제품들은 어떤건가요?

2. 혹시 논문들을 보고 본인 혼자서 정리한 protocol이 별도로 있나요?

정리된 파일이 혹시 있다면 첨부파일로 올려주시기 바랍니다.

레벨01 우우리 (대학원생)
24.10.21 20:21
질문자

현재 구매한 제품은 Trypan blue solution 0.4%, DMEM - sigma D5030만 구매했습니다.

뭣도 모르고 일단 구매부터 하면 혼날거 같아서요...

프로토콜은 여러가지 봐서 정리했는데요

1. 마취 후 70% 알콜에 담군 다음 해부실시

2. 지방 적출 후 PBS에 wash

3. 소독한 가위로 잘게 자른 다음 collagenase type 1(media에 녹여서 사용) 으로 37도에서 1시간 소화과정 실시

4. 70um mesh에 거른다

5. 2ml media 추가 후 180g으로 5분 centrifuge

6. primary adipocytes 분리 후 cell은 KRBH buffer로 3번 wash

7. cell freezing medium-DMSO를 넣고 -80도 보관 (용량은 잘 모름)

일단은 이렇게 정리해놨습니다.

레벨05 BlackSmile (과기인)
24.10.31 11:04

아래 링크의 논문을 한번 참고해보시기 바랍니다.

https://star-protocols.cell.com/protocols/552

사진도 들어있어서 감을 잡기 비교적 편하실 것 같습니다.

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