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Q western blot trasnfer 아예안됨.. 도와주세요

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레벨02 똥싸는기계 (대학원생)

  • 24.10.01 01:01
  • 조회531

안녕하세요 western blot 처음인데, 결과가 아예 안 떠서 막막한 상태입니다 ㅠㅠ 도와주세요...

사진처럼 gel을 내리고,
transfer을 했는데 사진처럼 membrane에 손상(곳곳이 투명해짐)이 가고, ponseau s로 염색해도 아무것도 뜨지 않습니다.

1. 갤 총 4개를 했는데, 100V로 transfer 하니 0.1A 이상 오르지 않아서(0.3A 이상이 되어야 맞다고 배웠습니다),
 볼트 기준이 아닌 암페어 기준으로 바꾸어 0.4A으로 진행했습니다.
혹시 암페어가 너무 높아 membrane에 손상이 가해진 것일까요?

세포에서 단백질 정량이 잘 되지 않아서 결과를 기대하고 있지 않았는데,
standard조차 ponseau s로 염색되지 않은 걸 보아
단백질 정량만의 문제가 아닌 것 같아 질문드립니다...

여러가지 확률들에 대해 공유해주시면 정말 감사하겠습니다.

western blot trasnfer 아예안됨.. 도와주세요

Cell Biology > Transfection

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A 답변 2

  • 채택된 답변입니다.
  • 레벨05 ㅈㅌ한 (대학생)
  • 24.10.01 01:44

퐁슈로 staining 안되는 건 자주 있는 일입니다 다만, 양상을 보았을 때 아예 트랜스퍼가 되지 않았어요

일정 시간이 지나면 트랜스퍼의 A가 바뀝니다 처음 300mA면 크게 상관 없구요

지금 보았을 때 저도 했던 실수가 보이는데 3M paper를 몇장씩 하셨나요? 양쪽으로 1장씩 넣었나요? 그렇다면 압착이 잘 안돼서 그 사이로 다 빠져나갔을 수 있어요 2장씩 해보세요 양쪽으로 2x2=4

  • 레벨02 똥싸는기계 (대학원생)
  • 24.10.01 22:25
  • 질문자

아.,!  paper가 두꺼워서 1장씩 넣어 진행했는데
그것도 원인일 수 있겠네요. 참고해서 다시 진행해보겠습니다. 의견 정말 감사합니다!!

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