Q 자극을 줘도 receptor의 인산화에 변화가 안 보여요 ㅠㅠ
레벨01 나도실험잘하고싶다 (대학원생)
- 24.08.08 14:49
- 조회229
안녕하세요. 석사 재학중인 대학원생입니다.
같은 문제로 지금 1년째 해결되지 않아 도움을 요청하고자 질문 올립니다..ㅠㅠ
현재 receptor에 자극을 주고 인산화의 변화를 살펴보고 있는데요.
ligand자극을 줘도 인산화 차이가 나타나지 않습니다...
자극을 주지 않은 샘플에서도 인산화가 너무 진하게 나타납니다.ㅠㅠ.
그렇다고 자극이 가지 않는 것은 아닌게 하위 signal을 찍어보면 자극 유뮤에 따라서 p-Erk 밴드가 없고 있고가 뚜렷해요. Receptor의 phosphor form만 계속 차이가 뚜렷하지 않습니다…ㅠㅠㅠ
실험 과정은 cell에 virus로 24시간 치고-> 18시간 serum free media로 starvation 시켜준 다음에 ligand 자극 줍니다.
자극을 주지 않은 그룹이랑 준 그룹이랑 phosphor form이 차이가 나야 다음 스텝으로 넘어갈 수 있을것같은데 지금 계속해서 같은 문제에서 멈춰있습니다.
발현양을 줄여도 마찬가지입니다. Virus transduction으로 발현시키기 이전에 transient transfection방법도 써봤는데 똑같이 자극유무에 따른 phosphorylation의 변화가 크지 않았습니다.
뭐가 문제일까요?ㅠㅠㅠㅠ제발 도와주세요…..
starvation 시간을 늘려볼까요???ㅠㅠㅠㅠ
위에서부터 차례대로 phosphor receptor, receptor, p-erk,erk blot입니다.
Cell Biology > etc.
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