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Q 플라스미드 dna 추출 후 전기영동 실험결과

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레벨01 키다리면봉 (일반인)

  • 24.07.27 18:09
  • 조회738

 왼쪽이 (-)극 오른쪽이 (+)극입니다. 빨간색 밴드는 로딩연습한거라 무시하셔도 됩니다.

실험 중 RNase 용액을 넣는 것을 까먹었고 safe shine blue 용액이 없어 flesh blue용액을 사용하였습니다.

safe shine blue는 전기영동 전 dna와 혼합하여 사용하는 것이고 flesh blue는 전기영동 후에 사용하는 용도인데 방법을 safe shine blue처럼 사용했습니다.

전기영동 시간은 파란 밴드가 거의 아래쪽으로 왓길래 20분만 하였습니다.

다른 실험들 전기영동 후 밴드 확인하면 여러개의 밴드가 선명도 높게 나오던데 제 실험에서 밴드는 육안으로 봤을 때 두 개와 흐릿하게 나왔습니다.

 chat gpt에 물어보니 두 개의 밴드가 크기 때문일 수도 있고 dna 형태 때문일 수도 있다고 하는데 뭐가 맞는지 모르겠습니다.

아니면 RNA 분리를 안해서 저렇게 두 개로 밖에 안 나눠지고 선명도가 낮은걸까요?

 밴드 해석과 성공인지 실패인지 알려주세요. 실패면 이유도 적어주실 수 있을까요? 


플라스미드 dna 추출 후 전기영동 실험결과

Mol. Biol.-DNA > etc.

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답변등록

A 답변 10

  • 레벨05 TMV세균맨 (과기인) heart
  • 24.07.27 20:14

Agarose gel을 전기영동 한 뒤에 UV 상에서 관찰하여야합니다.

해당 밴드는 DNA나 RNA 가 아닌 Loading dye입니다.

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.27 21:38

1. Flash blue는 gel을 염색하는 것이 좋습니다.

methylene blue와 같으며 (+)를 나타내기 따라서 DNA와 결합해서 육안으로 파란색으로 plasmid를 확인할 수 있습니다.


2. plasmid를 전기영동 했기 때문에 band가 여러개 나오지 않습니다.


3. 첨부사진을 보면 어느정도 결과가 나온것 같이 보입니다.


4. 어떤 plasmid인지 안나와있고, 마커도 전기영동을 하지 않았기 때문에 분석할 정보가 제한적입니다.


5. 제일 아래 푸른색은 dye이고 위의 푸른색이 plasmid입니다.

  • 레벨01 키다리면봉 (일반인)
  • 24.07.28 12:39 (수정)

지금 봤어요. 답변해주셔서 감사합니다.

1. 플라스미드를 전기영동을 했기에 왜 밴드 수가 적나요?

4. 대장균 사용했습니다. 플라스미드가 (+)로 이동했다는 정보 외엔 더 알 수 있는건 없을까요?


  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.28 12:44

1. plasmid는 하나만 들어있기 때문에 이론적으로는 1개, 실제 실험해 보면 3개 까지 band가 나옵니다.


2. 그러나 질문에서 사용한 염색시약은 전문 연구용 DNA 염색 시약이 아니기 때문에 약한 band는 안보입니다.


3. 따라서 제일 양이 많은 1개 정도만 보입니다.


4. 정확히 보려면 적어도 marker DNA와 같이 전기영동을 해야 하고 염색 시약을 변경을 하는 것이 좋습니다.

  • 레벨01 키다리면봉 (일반인)
  • 24.07.28 22:13 (수정)

답변 감사합니다. 

만약 RNA가 파괴 안되었으면 RNA 밴드도 나왔어야할까요?

 맨 아래 푸른색 dye에는 플라스미드가 없나요?

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.28 22:27

RNA가 있으면 나옵니다.


위 답변에서 plasmid 가 1개만 있다고 했는데 아래 dye에 plasmid 가 있으면 두개가 되기 때문에 있을 가능성이 없습니다.


또한 그정도로 작은 plasmid는 없으면 공부를 더 해보면 알수있습니다.



  • 레벨01 키다리면봉 (일반인)
  • 24.07.29 15:06

methylene blue가 basic dye이고 dye밴드가 loading dye가 아닌 basic dye인가요?

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.29 15:12

dye는 loading dye를 말하는 것이고 DNA와 결합하는 용도가 아니라 전기영동 진행정도를 확인하기 위한 용도입니다.


methylene blue는 염색 시약의 의미로 dye라고 부르지만 전기영동에서는 DNA와 결합하여 육안으로 보이게 하는 역할입니다.

  • 레벨01 키다리면봉 (일반인)
  • 24.07.29 15:59 (수정)

실험방법이 파라필름 위에 플라스미드와 flash blue stain을 섞고 well에 주입하고 전기영동 시켰어요.

생물나라에서 flash blue에 로딩다이가 안 들어 있다고 했는데

그럼 로딩다이가 flash blue일까요?

로딩다이밴드가 왜 보이는 건지 궁금합니다

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.29 16:56

Flash blue에는 loading dye가 안들어 있습니다.


전기영동 할 때는 기본적으로 loading dye를 사용하는데 질문자는 전기영동에 대하여 잘 알지 못하기 때문에 사용을 안한것으로 보입니다.


그넣다면 남아있는 RNA라고 봐야 합니다.



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