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Q 시료에 H2O2처리

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레벨03 yxong (일반인)

  • 24.07.18 11:23
  • 조회1544

안녕하세요 ~

시료에 H2O2 처리에 대해 헷갈리는 부분이 있어서요


제가 지금 키우는 세포에 H2O2+시료를 넣고 mtt로 결과를 확인하려고 합니다.

그런데 여기서 예를들면

시료농도 100, 200, 300, 400(µg/ml)으로 하고

H2O2농도 100(µM)으로 하면

각 well에 100µl 씩 넣는다고 하면 제가 농도당 4well를 사용할 예정이라 넉넉하게 1ml 필요량이라고 하면

시료농도100 + H2O2 = 1ml 필요하다고 하면


1) 만든 시료 추출물 500µl + 만든 H2O2 500 µl = 1ml 로 해서 플레이트에 넣으면 될까요?

2) 1번 방식으로 하면 농도가 무너져서 1ml에 

     H2O2를 만들때 1000µM 용액 100µl + 100농도시료추출물 900µl = 1ml 로 해서 플레이트에 넣으면 될까요?


1ml의 용액을 만들때 

①필요한 농도의 시료 (500µl)와 ②100µM농도 H2O2 (500µl)를 만들고 각각의 500µl 씩 합쳐서 1ml을 플레이트에 넣는건가요 ?


시료에 H2O2를 첨가할때  어떤 방식으로 넣어야 하는지 의견 나눠주시면 감사하겠습니다  

Cell Biology > Cell Culture

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답변등록

A 답변 14

  • 채택된 답변입니다.
  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.18 12:03

1. 두 성분을 혼합하면 각각 희석되기 때문에 희석 비율을 감안하여 혼합할 때의 농도를 정하면 됩니다.


2. 예를 들어 1 : 1로 혼합할 경우 각 2배 농도로 혼합하면 됩니다.


3. 혼합 방법은 여러가지이기 때문에 원리를 알고 응용을 하면 됩니다.


4. 다른 예를 들면 시료 100ul + H2O2 100ul + 용매 800ul로 혼합할 경우

시료와 H2O2는 각 10배 희석되기 때문에 10배 농축된 농도를 혼합 하면 됩니다.

  • 레벨03 yxong (일반인)
  • 24.07.18 12:23 (수정)
  • 질문자

소중한 답변 감사합니다 ~

그럼 혹시 1 : 1 로 혼합할 경우 각 2배 농도로 혼합한다고 하셨으면

제가 원하는 건 시료농도 100, 200, 300에 H2O2 100이면

시료농도 (100) + H2O2 (100) ,

시료농도 (200) + H2O2 (100) ,

시료농도 (300) + H2O2 (100)

이 아닌 


시료농도 (200) + H2O2 (200) ,

시료농도 (400) + H2O2 (200) ,  

시료농도 (600) + H2O2 (200) 

이걸로 해야한다는 말씀이신거죠?

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.18 12:26

네, 그렇습니다.

  • 레벨03 yxong (일반인)
  • 24.07.18 12:42
  • 질문자

그런데 하나 더 여쭈어본다면

H2O2만 시료 0인 웰에 넣어야 하는데

H2O2는 100µM이 필요한데 2배 희석 이런거 없이 

단독 H2O2니까 H2O2만 100µM짜리 100µl 만 넣으면 되는거겠죠?

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.18 13:02

100uM을 사용하면 100ul 그대로 사용하면 됩니다.

  • 레벨03 yxong (일반인)
  • 24.07.18 13:11
  • 질문자

원래 각 웰에 시료농도당

1000, 500 , 250,  0(control) 이렇게 시료를 넣을때

시료 stock, DMSO stock, 배지를 합쳐서 만들잖아요


예를들어 

시료 농도 1000 (1ml) = 시료stock 100µl  + DMSO stock 0µl + 배지 900µl

시료 농도 500 (1ml) = 시료stock 500µl  + DMSO stock 50µl + 배지 900µl

시료 농도  0(control) (1ml) = 시료stock 0µl  + DMSO stock 100µl + 배지 900µl


이런식인데

제가 플레이트를

시료농도순으로

0 250 500 1000 으로 한다고 하면


선생님께서 말씀하신 0 에는 오직 H2O2 100µM만 필요하면 희석없이 H2O2 100µM만 넣으면 되는지

아니면 

0에 있는건 시료 컨트롤 값이니 H2O2 100µM 을 원래 사용하는건데 희석할예정으로 

200µM에 위의 밑줄친 시료농도 0(컨트롤) 1:1로 해야 하는지요 ? 마지막 질문입니다 정말 감사합니다.

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.18 13:16 (수정)

시료가 녹아있는 것을 사용할텐데 DMSO는 왜 사용하나요?


정확히 well 구성 성분이 어떻게 되나요?

  • 레벨03 yxong (일반인)
  • 24.07.18 13:22
  • 질문자

시료를 감압농축 한거라 DMSO로 녹였어요

구성성분은 추가로 없고 그럼 마지막 0(control) 에는 시료0(control)과 H2O2의 희석이 있어야 할까요 ?

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.18 13:30

질문에 "제가 지금 키우는 세포에 H2O2+시료를 넣고 mtt로 결과를 확인하려고 합니다."라고 했는데


시료와 H2O2를 동시에 처리하나요 순차적으로 처리하나요?

  • 레벨03 yxong (일반인)
  • 24.07.18 13:43
  • 질문자

일단 시료 먼저 처리하고 2h 뒤에 시료+H2O2 처리합니다

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.18 13:53

그럼 계산이 달라집니다.


H2O2 100uM을 final로 처리 할때 부피는 얼마나 넣어주나요?


시료 0은 DMSO 100, media 900으로 하면 됩니다.

  • 레벨03 yxong (일반인)
  • 24.07.18 14:01
  • 질문자

그럼 시료 0에는  DMSO 100, media 900으로 하고

시료0과 같이 넣는 H2O2를 구하면 되는건데 여기서


H2O2 100uM을 final로 처리 할때 well당 100ul씩 넣어야 하니까 

시료 0 (50ul) +H2O2 100uM (50ul) = 100ul

이렇게 답변 드리는게 맞을까요?

  • 레벨03 yxong (일반인)
  • 24.07.18 14:06
  • 질문자

선생님, 그럼 시료0에는 제가

H2O2는 100µM이 필요하면  1:1로 희석한다고 하면


시료 0[ DMSO 100, media 900 ]+ H2O2 (200µM) 으로 해야하는게 맞는걸까요?

  • 레벨08 SPEED (일반인) heart
  • 24.07.18 16:47

시료 0ug의 경우 


DMSO 100 + media 900

100ul/well 처리, 2hr

200uM H2O2 100ul/well 처리

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