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polyplus-INTERFERin siRNA trasnfection reagent 사용하시는 선생님 있나요

레벨1 멋있는딸기 (대학생)

cell에 konckdown을 진행하기 위하여 polyplus사의 INTERFERin siRNA trasnfection reagent를 사용하는데 6-well plate를 할땐 실험이 KD이 잘 진행되었는데 100mm dish scale에선 KD이 잘 안되네요.

protocol이나 제품 문서에는 나와있지 않지만 siRNA Mixture의 용량이 커지면 siRNA와 reagent가 aggregation되듯이 뭔가 뭉쳐있는게 떠다니는게 있던데 혹시 이것때문인가도 의심됩니다.

이럴경우 mixture를 여러 tube에 소문하여 만든 후 10분 반응시켜 다시 하나로 합쳐 transfection 진행해도 될까요.

6-well plate할 땐 siRNA 5ul/ reagent 14ul를 OPti-MEM 200ul에 섞어 mixture만들었고 100mm dish에 할땐 siRNA 25ul/ reagent 70ul를 OPti-MEM 500ul에 섞어 mixture형성하였습니다.

벌서 여러번 이와같은 상황이고 실험이 6일짜리 스케쥴이라 시간낭비도 너무 심합니다... 혹시 같은 문제를 겪다가 해결하신 선생님 알려주시면 감사하겠습니다.

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답변 4

nucleic acid와 transfection reagent를 섞을 때 서로 농도가 높으면 aggregation됩니다. 뭉쳐다니는게 보이면 이미 망한겁니다.

siRNA와 Transfection reagent를 각각 다른 tube에서 희석하고(vortex 반드시 하고요) 희석된 siRNA와 희석된 Transfection reagent를 섞어주어야 합니다.

절대 한 tube에 siRNA와 Transfection reagent를 넣으면 안됩니다.

답변 감사합니다 dd선생님

혹시 희석해서 다시 합친다는 말씀이 media에 각각 희석하여 합친 후 상온에 10분간 반응하여 cell에 뿌리면 된다는 말씀이신가요??

네, 그대로 하시면 됩니다.

감사합니다 선생님!!