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제한효소 처리 결과 질문

레벨1 dPfls (대학생)

EcoR1 제한효소 처리

37도에 30분 배양해서 전기영동으로 확인했는데

어떤 것은 잘, 많이 잘리고 어떤 것은 조금만 잘렸는데

왜 똑같은 시간으로 제한효소 처리를 했는데 결과가 다르게 나오나요?

형질전환 후 colony pcr, 전기영동으로 확인한 다음에

white colony만 제한효소로 처리했습니다.

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답변 1

사진도 없고 설명이 자세하지 않아서 정확히는 말씀드릴 수가 없네요

white colony에 EcoR I 말씀하신거보니 T vector에 TA cloning하고 EcoR I으로 insert 유무 확인하신 것 같습니다.

일단, DNA의 양이 동일한가요? DNA의 양이 다르면 잘린 정도도 달라집니다.

DNA purification 시 오염되었다면 (alcohol, phenol, ...) enzyme activity가 떨어집니다.

pippeting error 때문에 EcoR I이나 다른 reagent가 다르게 들어갔을 수 있습니다.

그렇지만, Insert의 유무를 확인하기 위함에 EcoR I에 얼마나 잘렸는지는 별로 중요하지 않습니다.