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웨스턴 Housekeeping gene이 일정한 band로 안나와요ㅠㅠ

레벨1 핑광이 (대학원생)

저는 지금 석박통합 1학차 학생입니다.

웨스턴블랏을 하는데 실험을 거듭할수록 더 결과가 안좋아지는 것 같아요ㅠ

밴드가 한줄로 나와야되는데 두개 밴드가 잡힌다던지 막 뭉개져서 보인다던지 하기도하고 무엇보다 b-actin양이 일정하게 안나오네요...

정량을 하려면 b-actin 양이 일정해야하는데 매번 정량하면서도 찝찝합니다.

pipetting 하고 sample loading 했고 일정하게 안들어갈까봐 피펫 눈금이 돌아가고있지 않은지 로딩 할때마다 확인했어요ㅠㅠ

좀 더 일정하게 band가 나오게끔 하려면 뭘 더 해봐야할까요.. BCA assay부터 다시 하는중이긴한데 이제는 저를 못믿겠습니다..

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답변 2

안녕하세요 원래 실험이 익숙하지 않을 경우 data가 많이 흔들리거나 결과가 안나올 수 있습니다.

이런 경우 조금 죄송한 일이지만 숙련자(박사 과정생/포닥)분들과 동일한 샘플로 같이 실험해보면 좋을 것 같습니다.

동일한 샘플을 이용하여 동일한 과정으로 실험을 진행하는데 숙련자의 결과는 잘 나오는데 실험자의 결과가 안나온다면 아무래도 테크닉 적인 부분에 예상치 못한 문제가 있을 가능성이 높으니까요!

그리고 같이 실험을 하면서 누가 결과가 잘 나오나를 보는게 아니라 옆에서 실험을 보기도 하면서 글 작성자가 놓친 부분이나 가볍게 생각한 부분(실험 결과는 사소한 원인에 의해서 안나오기도 하니까요)이 없는지도 확인해보시는게 좋을 것 같습니다.

아무래도 그렇죠.... 감사합니다..ㅠ