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웨스턴 gradient gel 만드는 방법

레벨1 룰루미냉 (대학원생)

등록일 2023.05.29 22:01:57
조회1092

안녕하세요

웨스턴 블랏으로 베타액틴과 200kda 짜리 단백질을 동시에 내려서 보려고 하는데요

6% gel로 하니 베타엑틴이 로딩 중 다 내려가 버리고,

8% gel로 하니 200kda 짜리 단백질이 덜내려가는 것 같아 두가지를 혼합한

gradient gel로 만들어서 내려보고 싶은데

혹시 만들 줄 아시는 웨스탄 블랏 고수님 계실까요?

도움 주시면 감사하겠습니다ㅠㅠ

#웨스턴 블랏

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답변 4

답변등록

123 (비회원)
2023.05.30 00:51

GAPDH 등 다른 house keeping gene을 사용하시면 되지 않나요?

꼭 beta-actin을 사용하셔야 하는 이유가 있으신지?

레벨8 SPEED
2023.05.30 11:45

- 두 가지 %의 gel을 혼합하는 장치가 필요합니다.

- 조금 번거롭기 때문에 gel을 구매해서 사용하는 것이 편할겁니다.

레벨5 차몬드
2023.05.31 12:30

8% running gel을 반 정도 만들어서넣고 에탄올 넣어 굳히고,

6% running gel을 나머지 반 넣고 굳히고,

그리고 stacking gel 넣고 그렇게 하면...... 안 되려나요....?

레벨1 hlpark
2023.06.02 06:39

조금의 편법이긴 하지만..8% gel 과 6% gel 을 만드셔서 8%를 먼저 파이펫으로 조심히 평평히 1/3-절반정도 붓고, 그 위에 바로 천천히 6% gel을 부어보세요. 그 이후는 기존 방법과 똑같은 방법으로 만드시면 됩니다. 샘플 로딩하시기 전에 마커만 running 하여서 되는지 확인도 한번 해보시구요. 되기는 하지만 논문에 사용할 데이터라면...사는 것을 추천 드릴께요. 컨펌하는 정도는 사용하실 수 있으실 겁니다.

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