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Gel에서 Coomassie blue staining 관련 질문입니다.

레벨2 jineee (대학생)

등록일 2023.05.27 13:43:44
조회1397

안녕하세요.

현재 마우스 지방조직으로 웨스턴 진행중인 대학원생입니다.

지금 실험의 문제점은 하우스키핑진이 일정하게 안나오는것인데요 ㅜㅜ

(폰슈로 멤브레인 염색 시 일정한데도 안나옴니다ㅜㅜ)

여러가지 수정해보다가 겔에서 멤브레인으로 트랜스퍼 후 겔을 쿠마시 블루로 염색했을때 겔에 단백질이 염색되면 트랜스퍼가 완벽하게 안되는것 아닐까 싶어서 진행해보았는데요,

마커는 젤 분자량 큰 부분 말고는 깔끔하게 트랜스퍼 된것같은데 단백질 샘플 로딩한 부분은 라인이 그대로 남아있더라구요!

그럼 트랜스퍼가 덜 되었다고 판단할 수 있는것일까요??
마커가 다 넘어갔는데 그 부분의 샘플 단백질들은 넘어가지 않을수도 있나요??

트랜스퍼 조건은 120V,250 mA, 90분 입니다!

아래사진의 제일 오른쪽이 마커입니다!

upload_image

#Western blot
#Mouse
#BAT

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답변 1

답변등록

레벨8 SPEED
2023.05.27 20:00

1. 몇%인가요?

2. 동일하게 2장을 전기영동을 해서 1장은 바로 염색, 1장은 transfer 후 염색을 해보세요.

3. well이 모두 다른 시료인가요?

4. 동일한 loading 문제는 2번에서 확인 가능합니다.

5. loading 문제로 HK가 일정하게 나오지 않으면 pipetting연습을 할 수 밖에 없습니다.

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