부유세포 해동 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q 부유세포 해동

레벨05 칸쵸 (일반인)

부유세포를 thawing 하려고 하는데, 이러한 과정이 맞을까요?

1. cell stock을 water bath에서 약 2분간 최대한 빠르게 녹인다.

2. 125 ml flask에 20 ml media를 넣어 준 후 stock 안에 있는 cell을 모두 flask에 넣어준다.

3. 24 시간 정도 incubate

4. 새로운 125 ml flask를 준비하여 cell을 옮겨준다.

이때 cell down을 하지 않고 그냥 옮겨만 줘도 되나요?

Cell Biology > Cell Culture

A 답변 5

3,4번은 안 해도 됩니다.

2번 미디어 볼륨은 cell density에 맞게 넣어주시면 되고

매일매일 density 측정하여 잘 늘어나는지 확인해주세요.

DMSO는 제거할 필요가 없이 저렇게만 하면 되나요?

stock할 때 들어가는 DMSO가 남아잇으면 세포에 toxic하므로

1번과정 후에 stock에 있는 셀을 10ml의 new media에 넣어 down한 번 시켜준 후 pellet만 flask에 seeding해주셔요~

DMSO는 1ml frozen stock에 많아야 10% 정도 들어있을 것이고 20ml 이상의 미디어에 희석되기 때문에 최종 농도가 1% 미만입니다.

판매되는 cell의 제조사 매뉴얼에도 DMSO 제거 프로토콜은 포함되어 있지 않으며, 경험상으로도 cell viability나 density에 영향을 주지 않았습니다.

https://www.ibric.org/myboard/read.php?Board=exp_qna&id=761401&modetype=mp&ksr=1&FindText=hybridoma%20cell

그렇군요.

갑론을박이 있는것 같습니다~

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(일반인)

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