cell culture시, 이거 오염된건가요?ㅠㅠ 키우면 키울수록 의아합니다ㅠㅠ | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q cell culture시, 이거 오염된건가요?ㅠㅠ 키우면 키울수록 의아합니다ㅠㅠ

레벨01 Y.Y (과기인)

23.03.31 20:03
조회3677

안녕하세요. 대학원생활 곧 1년이 되어가는 대학원생입니다.

caco2 cell을 키우는데, 요즘들어 dish에 검은색 점이나 cell모양인 것 같은데 검은색 점 모양으로 생긴 것 투성이입니다.

처음에 stock을 풀어 키울때는 분명 깨끗하게 잘자라고 있었는데, stock에 배지만 갈아주면서 키우고 있는데 어느순간 너무나 점같은 것들이 바닥에 너무 많아졌습니다.

마지막 cell stock을 풀었는데 바닥에 붙기는 너무 잘붙고, 모양도 너무 예쁘게 잘 붙어서 기분좋게 집에 갔는데 날이 지나면 지날수록 시커먼 점들이 따닥따닥 붙어서 너무 걱정이 됩니다.

이게 마지막 cell stock푼거였어서 걱정에 걱정이 더 얹혔습니다.

아직 미숙해서 어려움이 많은데, 실험실에 선배나 동기가 없어서 어떻게 해야하는지 몰라서 글을 적습니다.

마지막 stock 푼 것이 오염됐을까봐 잠도 못자고 있습니다.

만약 이게 오염된 것이라면 혹시 caco2 cell을 배양하고 계시는 lab실 있으실까요? 혹시 cell을 분양해주실 수 있다면 꼭 좀 연락부탁드립니다.

정말 간절합니다...

Cell Biology > Cell Culture

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A 답변 9

레벨05 실험조아
23.03.31 20:09

말로 설명하시는 것보다 사진을 제시하시는게 훨씬 효과적입니다.

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레벨01 Y.Y
23.03.31 20:40
질문자

내용 관련 이미지입니다.

1번째 사진은 바닥에 작은 것들 모두 검정색입니다. 그리고 사진상에는 동그란 cell처럼 보일수 있는데, 저 cell들도 다 검은색 점모양으로 뭉쳐 있습니다.

2번째 사진은 caco2 cell 모양인데, 주변 바닥에 검은색 점 같은것들이 많습니다.

upload_image

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레벨08 SPEED heart
23.03.31 22:40

1. media change만 하고 계속 배양하는 이유가 있나요?

2. 세포는 적정 배양 후 본 실험을 진행하는것이 좋습니다.

3. 세포가 거의 다 죽었습니다.

4. media는 투명한가요?

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레벨01 매드사이언스
23.04.01 12:38

plate가 깨끗한지 확인해 보셨나요?

저도 가끔씩 plate 문제일 경우도 많더라구요.

그리고 cell stock 풀고 media만 계속 change 해줬다는게 계대 없이 media change만 꾸준히 한다는 의미인가 궁금하네요

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레벨05 실험조아
23.04.01 15:38

caco2 cell 키우기가 어렵긴 한 모양이네요.

TE에 잘 떨어지지도 않고 잘 자라지도 않는다는 의견들을 보았습니다.

media change만 해주었다면 생장에 좋을것 같지 않네요.

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레벨01 유구상 (비회원)
23.04.02 23:22

세포 상태에 대해서는 위에 다른 선생님들께서 의견 주셨으니 많이 참고하셨으리라 생각합니다.

좀 더 확실한 검증을 하고 싶다면, bionics / cosmogentech 등의 sequencing 회사에 'Microbial Identification' 또는'Mycoplasma test' 등을 보내보면 도움이 될 듯 합니다.

링크: Microbial Identification : Genotyping Service - 바이오닉스 (bionicsro.co.kr)

Caco-2 cell line은 저도 아주 잠깐 다뤄본 경험이 있어서 말씀드리면, 자라는 속도도 매우 느리고 키우기 까다로웠던 세포주였던 것 같네요 ㅎㅎ..

다행히 한국세포주은행 (서울대학교)에서 구매할 수 있으니, 새로 분양받고 싶다면 여기서 구매하시면 빠르게 구할 수 있을 것 같습니다.

링크: Korean Cell Line Bank (snu.ac.kr)

하시는 연구 잘 되시길 바랍니다.

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레벨01 Y.Y
23.04.03 12:49
질문자

STOCK을 풀었는데 셀을 가득 키우려고합니다. 하지만 caco2 셀이 느리게 자라서 media를 바꿔가면서 가득찰 때까지 기다리고 있습니다.

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레벨02 bluebird
23.04.05 17:32

오염이라면 박테리아가 아닐까요?

ready made LB agar plate 같은거 사서 한번 키워보세요 뭐가 자라나..

아니면 bacterial 16s sequencing primer 사서 PCR 해보면 됩니다..

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채택된 답변입니다.
레벨02 bluebird
23.04.05 17:36

이거 아니에요?

Biological UFO ㅋㅋ

https://www.biorxiv.org/content/10.1101/366906v1.full

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