cDNA 전기영동 시 marker가 안내려갑니다. | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q cDNA 전기영동 시 marker가 안내려갑니다.

레벨01 김해김석희 (대학생)

안녕하십니까.

다름이 아니오라 현재 RAW.264.7 Cell에 LPS를 처리하고 샘플을 treat하여 tnf-a 발현정도를 확인하기위해 cDNA 전기영동 하였습니다.

사진에서 보시면 marker가 자꾸 덜내려가는 모습을 보여주어서 질문드립니다..

전기영동은 약 25분 진행하였습니다.

마커는 100bp입니다

Mol. Biol.-DNA > etc.

A 답변 4

marker만 늦게 전개 된 게 맞나요? agarose 농도가 높지는 않은지 agarose가 균일하게 녹았는지 먼저 체크해 보세요.

그런데 그것 과는 별개로 cDNA를 loading한 것이 맞나요?

전 cDNA를 전기영동해 본 적이 없어서요.

tnf-a 발현을 보기 위한다면 만들어진 cDNA를 이용해서 tnf-a qPCR primer로 증폭한 후 lodaing해야 하지 않는지요.

100 bp 정도 되는 DNA를 보기 위해서는 gel %를 높이는 것이 좋습니다.

2-3% 정도가 좋습니다.

그리고 사진은 gel이 아직 다 안내려가서 마커분리가 안된 것으로 보입니다.

조금 더 내리면 마커밴드가 잘 보일겁니다.

만들어진 cDNA를 이용해서 tnf-a qPCR primer로 증폭한 후 lodaing한것입니다..! 제가 이 내용을 빠뜨리고 질문드렸네요 혼란드려서 죄송합니다.

피드백 주신대로 겔 농도를 좀더 높여서 다시 실험해보겠습니다. 감사합니다!

gel %도 올리시고 전기영동 시간도 더 올리셔야 할거 같아요

저는 80V로 40분은 해야 중간 사이즈 band를 확인했어서

시간도 늘리셔야 할거 같아요

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(일반인)

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