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HPLC 관련 질문 드립니다.

레벨2 연람 (대학생)

등록일 2023.03.27 16:58:34
조회879

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위 사진은 아세트아미노펜 hplc 분석 사진입니다. 아세트아미노펜 단일 분석을 진행했는데, 피크가 2개가 검출되었습니다. 시료는 MeOH에 녹이고, 크로마토 조건은 ACN:H2O=40:60, 검출 파장 260nm, 유속 1.5ml/min, 컬럼은 C18컬럼을 사용했습니다. 어떤 이유로 아세트아미노펜 피크가 2개가 검출되었는지 알 수 있을까요?

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위 사진은 아세트아미노펜과 동일 조건으로 Methyl p-hydroxybenzoate 단일 분석을 진행한 사진입니다. RT 초기 2분에서 3분 사이에 알 수 없는 피크가 2개가 검출되었는데 이유를 모르겠습니다. 실험 전 ACN:H2O=75:25 비율로 세척을 진행하고, ACN:H2O=40:60으로 안정화 진행 후 분석을 진행했습니다. 컬럼 세척이 제대로 안되서 고스트 피크가 발생한 걸까요?

문제 해결을 위해 필요한 정보가 있으시다면, 댓글 보는대로 정보알려드리겠습니다.

#hplc
#double peak
#ghost peak

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답변 8

답변등록

레벨8 SPEED
2023.03.27 17:04

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질문자가 채택한 답변입니다.

아세트아미노펜 순도가 어떻게되나요?

레벨2 연람 (대학생)
2023.03.27 17:05

sigma-aldrich에서 구매했고 순도는 99%입니다

레벨8 SPEED
2023.03.27 18:01

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질문자가 채택한 답변입니다.

컬럼 세척을 어떻게 하나요?

레벨2 연람 (대학생)
2023.03.29 22:41

컬럼 세척은 ACN:H2O = 75 : 25로 1시간 진행했고, 안정화는 ACN:H2O = 40 : 60으로 40분 진행했습니다. 각 유속은 분당 1ml입니다.

레벨8 SPEED
2023.03.30 08:15

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질문자가 채택한 답변입니다.

- 분석과 분석 사이에 컬러 세척을 진행 하나요?

- peak를 보면 컬럼 문제보다는 시료 문제로 보입니다.

- ACN 80%, MeOH 80%로 washing 후에도 2 peak가 나오면 시료문제로 봐야 할것 같습니다.

- 시료를 녹일 용기를 잘 확인 후 재 용해시켜 분석을 해보세요.

레벨2 연람 (대학생)
2023.03.30 12:30

- 분석과 분석 사이에 컬러 세척을 진행 하나요?

: 아니요

- peak를 보면 컬럼 문제보다는 시료 문제로 보입니다.

: 아세트아미노펜 새거 하나 있어서 다시 분석 진행해보려고 합니다.

- ACN 80%, MeOH 80%로 washing 후에도 2 peak가 나오면 시료문제로 봐야 할것 같습니다.

: ACN:H2O=80:20으로 세척을 진행하라는 건가요 ?

- 시료를 녹일 용기를 잘 확인 후 재 용해시켜 분석을 해보세요.

레벨8 SPEED
2023.03.30 12:48

채택답변
질문자가 채택한 답변입니다.

- 분석과 분석 사이에 컬러 세척을 진행 하지 않는 경우 분석 횟수가 늘어나면 앞의 결과와 다른 결과가 나옵니다.

- ACN 80% = ACN80% : DW 20%, MeOH 80% = MeOH 80% : DW20%

레벨2 연람 (대학생)
2023.03.30 13:48

네 답변 감사합니다.

세척 진행 후 다시 실험진행해서 결과확인해보겠습니다.

분석 사이에 세척 시간은 어느정도가 적당할까요. 그리고 이동상 조성은 ACN:H2O = 8:2 로 세척하고 분석 조건에 맞는 이동상 조건으로 안정화 후 분석을 진행하는게 맞나요?

그리고 두번째 사진의 Methyl p-hydroxybenzoate 피크 확인해보시면 앞쪽에 작은 피크가 2개가 나왔는데, 이것도 컬럼 세척때문에 발생한 것인가요? 답변해 주시면 감사합니다.

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