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Q MA/ZB 배지 제작 중 배지 내부 콜로니 컨텀 재문의 드립니다.
레벨01 mysonta (대학원생)
전에 배지 내부에서 콜로니 컨텀이 난다고 올렸던 사람인데요..
말씀하신대로 LB를 넣어서 같이 돌려보고 배양했는데 LB배지는 오염되지 않았습니다.
나중에 추가로 답변해주신거 봤는데 콜로니는 확실하구요 처음에는 작았다가 점점 커지고 콜로니는 확실합니다.
오염이 안된거면 들어가는 성분에 문제가 있을수도 있다고 하셨는데 그렇다면 저 배지에 먼저첨가한 뒤 멸균하고 바로 붓는데 멸균이 제대로 안된다는 의미이신건가요?
제가 생각하기에는 LB 배지에 컨텀이 안났다는 것은 멸균기에는 문제가 없다는 것이고 그렇다면 배지에 첨가되는 파우더나 각종 미량원소들은 오염이 되었던 안되었던 결국에는 멸균이 정상적으로 된다는것인데
그렇다면 클린벤치문제인걸까요?
클린벤치도 한번 전부 청소하고 배지 붓기전에 배지병과 플레이트를 항상 10분이상 uv로 멸균하고 붓고있습니다.
진짜 뭐가 문제인지 도무지 감이 안잡혀 정말 답답합니다...
도와주세요 ㅠ
Microbiology > Bacteria
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A 답변 3
한번에 몇 L씩 배지를 만드시나요? (플라스크나 비커를 이용한다면 한 용기에 얼마나 만드시는지요?)
혹시 LB 테스트라는게 소량으로 10ml 정도고, agar는 2~3L로 차이가 나는 볼륨 차이는 아니였나요?
멸균까지 문제가 아니라면, 분주에 문제겠죠...
클린벤치 표면을 소독했다면, 낙하균 테스트도 해봐야 할것 같습니다.
혹시 헤파필터 수명이 다한것은 아닌지요?
한 번에 만들때 6L씩 배지를 만들고 500ml씩 12병으로 만듭니다.
LB 배지는 agar를 넣지 않고 그냥 액체상태로 만들었습니다.
멸균 자체에 문제가 있는 지 확인하는 것이라 생각하여 플라스크 뚜껑을 열지 않도록 하려구요.
최근에 멸균 중에 1L짜리 병에 500씩 만드는 것은 변함이 없는데 가끔 넘칠 때가 있더라구요 병 표면에 배지가 넘쳐서 주륵 흐른 자국이 있을 때가 있습니다.
이것도 문제가 될까요?
클린벤치에서 오염이 되었을지도 모르겠어서 오늘은 다른 클린벤치에서 부어보려고 합니다.
필터교체는 한 지 오래되었다고 하네요..
배지가 넘쳐서 병표면에 의해 오염됐을 수도 있을것 같은데요
1리터짜리병에
500ml 두병,
600ml 두병(일부러 넘치게 하기위해)
300ml 두병정도 만들어보세요
그리고 각 한병씩은 플레이트에 분주를 하고 라벨링
남은 각 한병씩은 분주하지 말고 그대로
50~55도에서 보관해서 관찰해보면 이유를 알것 같습니다.
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