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C2C12 cell culture 분화 유도 확인 (사진)

레벨1 mintim99 (대학원생)

c2c12 cell 양만 불리면서 유지하려고 키우는 중인데, high density로 키운 것 같아서 분화가 유도 된 건지 확인해봐야 할 것 같은데, 눈으로는 크게 잘 모르겠습니다..

아래 사진 첨부하겠습니다

density (confluence) 별로 다양하게 찍어봤습니다

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답변 7

- 어떤 배지에서 배양했나요?

- 분화 안된것으로 보입니다.

- anti-MHC로 확인해 보면 정확히 알수 있습니다.

SPEED님 감사합니다!

culture media는 high glucose DMEM (+10% FBS + 1% p/s)를 쓰고 있습니다.

C2C12 cell 특징이 세포들끼리 contact 되면 분화 미디어 없이도 분화가 유도된다고 들어서 아직은 세포를 분화 없이 키우는 목적이라 혹시 상태가 괜찮은지 알아보고 싶었습니다.

anti-MHC는 western blot 실험을 진행해야 확인 가능한건가요? 이 부분은 잘 몰라서요..ㅠ

- 아래처럼 myoblast -> 분화가 되면 IHC로 확인 가능합니다.

[출처: January 2007 Journal of Cell Science 119(Pt 24):5106-13}

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네, 저도 myoblast에서 myotube로 분화되는 morphology는 찾아봐서 알긴 알지만, 저는 현재 분화를 시작한 것이 아니라서 단지 high density 때문에 분화 유도가 됐는지만 알고 싶었습니다..ㅠㅠㅠㅠ

육안으로는 정확히 알수없고 형태를 봐서 분화 전으로 보입니다.

cell passage가 높으면 분화가 잘 이루어지지 않는다고 알고있습니다

확인해보세여

C2C12는 계대 넘기기 전에 confluency가 50-60%정도 유지하면서 셀끼리 뭉치지 않도록 하는 것이 매우매우 중요합니다.

어느정도 뭉쳤다고 하더라도 트립신 처리 후 충분히 incubation하여서 cell끼리 떨어지도록 해야하고 디쉬나 플레이트를 탁탁쳐서 떨어트리는 등의 방법은 비추드립니다.

그리고 myh 확인해보실 필요없이 저정도로 꽉차면 못쓴다고 보시면 됩니다.

특히 이 cell line은 6-7계대로 사용하시고 그 이상은 불리는건 비추합니다.

그리고 10% FBS 에서는 튜브가 보일정도로 fusion단계가 잘 일어나진 않습니다. TGFbeta 수준이 높아서 근육분화나 fusion을 억제하기때문입니다.

그래서 보통 proliferaion은 10% FBS조성 메디아를 사용하고 differentiation할때는 FBS가 제외된 2% normal horse serum을 사용하여 분화를 유도합니다.

본내용 ATCC사 메뉴얼에도 있는데 실제로도 실험해보면 꼭 필요한 숙지사항들입니다.