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Q mini prep cell harvest

레벨05 오도도도돕 (대학생)

22.08.31 15:10
조회3091

mini prep이 내가 원하는 plasmid DNA를 얻기위해 하는걸로 plasmid를 불리기위해 진행하는걸로 아는데

cloning 진행한 균주가 plate에 colony가 떠서 pick해서 seed를 진행할려고 하는데요 cell harvest 후 colony pcr을 진행하기 위해 cell을 mini prep으로 진행하여 plasmid를 확보후 진행해야되는건지 그냥 cell harvest 후 진행하는건지 알수있을까요?

Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation

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레벨01 123 (비회원)
22.08.31 15:52

colony PCR은 말 그대로 colony를 picking해서 소량의 증류수에 풀고 그걸 template로 PCR 하는 방법입니다.

목적은 이후 스텝의 진행 여부를 확인하기 위함이므로 culture 전에 하는 것이 colony PCR입니다.

다만 이 방법도 PCR의 틀에서 벗어나지 않기 때문에

template 양을 조절하는 스텝이 들어갈 뿐 일반적으로 하는 PCR과 다르지 않습니다.

따라서 PCR로 확인하는 것은 어느 스텝에서든 해도 됩니다.

colony로 해도 되고,

culture된 E.coli로 해도 되고,

prep된 DNA로 해도 됩니다.

결과적으로 target 확인만 하면 되는 것이죠.

답변리플

레벨08 강시
22.09.01 11:20

잘 자란 colony를 멸균된 이쑤시개로 찍어낸다. 

E-tube의 바닥에 이쑤시개에 묻은 대장균을 묻힌다.

그 이쑤시개를 새로운 plate에 접종한다.

E-tube에 멸균된 DW 100 - 200 ul를 넣고 잘 풀어준다.

E-tube를 1-5분 정도 끓는 물에 담그거나 PCR 용 tube에 넣어서 95도로 5분정도 가열한다.

1-2 ul를 따서 PCR template로 사용해서 PCR 한다.