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HPLC column wash 방법 질문있습니다.

레벨1 하학화 (일반인)

안녕하세요.

현재 Size exclusion chromatography column을 이용해 HPLC를 돌리고 있는데, 최근들어 pressure이

높아졌습니다.

사용하는 solvent는 오로지 PBS인데 wash를 해도 pressure이 정상적으로 낮아지지 않습니다.

column을 거꾸로 해서 wash 해보기 및 D.W solvent 사용해서 wash 해보았지만 pressure이 낮아지지 않습니다.

무슨 방법이 있을까요?

감사합니다.

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답변 2

cleaning한지 오래지났다면 NaOH로 cleaning 한번 해보세요

컬럼에 단백질 침전물 등이 쌓여있을수 있습니다.

1. 먼저, 그게 column 의 문제인지 확인합니다.

이건 다른 column을 장착해서 유속에 맞게 흐르면 바로 확인 가능하죠.

2. 해당 column 모델명을 검색하면,

해당하는 column 에 대한 washing방법이 나올 거예요.

아래는 예시로 인터넷에서 Size exclusion chromatography column을 검색한 거예요.

upload_image

3. sample loading 할 때에, 꼭 0.22um 사이즈로 필터한 다음에 injection 하시고, 석출 되는 물질 정보를 알고 있다면, 그게 물에 녹는 다면 물을 계속 흘려주고 온도가 높아야 녹는거면 높여주고//

4. 제 경험에는 70% MeOH를 이용했는데, 너무 안 녹으면 100% 도 한다지만 이건 다~~ column by column이니깐 검색해 봅시다.