SDS-PAGE stacking gel 내 단백질 분리 문제 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q SDS-PAGE stacking gel 내 단백질 분리 문제

레벨02 arklion (과기인)

21.07.16 16:53
조회3140

KakaoTalk_20210716_164536034.jpg (다운로드 : 480)

안녕하세요.

SDS-PAGE 관련하여 문의드립니다.

제가 기존에 시약을 전부 만들어서 진행할 때는 전혀 문제가 없었는데

Bio-rad에서 TGX 제품을 한 번 써보고자 몇 번 진행을 해봤는데

첨부된 그림처럼 stacking gel에서 마커에서 단백질의 분리가 일어나더군요..
(천천히 내려보고자 50V로 진행하였습니다.)

사진에 검은 줄이 stacking gel과 resolving gel의 경계선입니다.

기존에는 dye 따라서 stacking을 지나 resolving에서 분리가 시작되었는데

몇 번을 반복해도 동일한 현상이 나타나는데 이러한 현상이 왜 생기는걸까요.

달라진 건 gel 제조 시 사용된 acrylamide와 buffer, SDS 뿐이긴 한데..

(APS와 TEMED는 기존 것을 사용했습니다.)

고견을 묻습니다.

Mol. Biol.-Protein > Western Blot

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A 답변 8

레벨08 SPEED heart
21.07.16 17:07

사진의 gel은 만든 gel인가요 TGX gel인가요?

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레벨02 arklion
21.07.16 17:44
질문자

SPEED 님.

사진의 gel은 TGX gel입니다.

기존에 TGX gel은 resolving gel과 stacking gel을 한 번에 굳히는데

위는 각각을 굳힌 것입니다.

(그렇게 하든 안하든 동일하게 stacking gel에서 분리가 나타나네요..)

답변리플

레벨08 SPEED heart
21.07.16 18:14

TGX gel은 precast gel 아닌가요?

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레벨02 arklion
21.07.16 18:19
질문자

제가 사용한것은 precast gel은 아니고 같은 브랜드의 fast cast 제품입니다.

TGX™ FastCast™ Acrylamide Kit, 10% 제품입니다.

https://www.biocompare.com/11119-Chemicals-and-Reagents/14310787-TGX-8482-FastCast-8482-Acrylamide-Kit-10/

답변리플

레벨08 SPEED heart
21.07.16 18:53

stacking gel은 몇 %인가요?

그리고 위의 답변에 stacking과 running gel을 동시에 굳힌다고 했는데

어떻게 한다는 것인가요?

연속 gel을 말하는 것 같습니다만..

답변리플

레벨02 arklion
21.07.16 19:11
질문자

제가 설명이 부족했습니다.

TGX FastCast 제품은 resolving gel을 부은 뒤, 바로 stacking gel을 부어서 함께 굳히도록 (시간 상 편하게) 매뉴얼에 나와있습니다. 그러나 저러나 위의 현상이 나타납니다.

해당 제품의 stacking gel은 많이들 사용하는 것과 동일하게 4%로 파악됩니다. (대리점 문의)

Stacking gel 조성의 문제인지는 업체에 문의를 남겨 두었지만, 제가 직접 제조 했을 때는 이런 현상이 전혀 나타나지 않았기도 하고 일반적이지는 않은 것 같아 혹 경험이 있으신가 하여 질문 남겼습니다.