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Q Cell counting, seeding 도와주세요 Speed님
레벨02 사고치는뚝딱이 (대학생)
안녕하세요
cell counting과 cell seeding 계산에 제가 잘못생각하는게 있는지 여쭤보고자 질문을 올리게 되었습니다.
다른분들이 설명해주신 내용과 비교했을 때 제가 뭐를 잘못생각하고 있는지 잘 모르겠습니다.
Hemacytometer를 통해 cell counting한 cell이 170이라 가정했을 때
170/4(4well이기 때문에)*2(Cell 10ul, Trypan blue 10ul)*6(dish) = 510
즉, 현재 cell 농도가 510*10^4ml입니다.
4 well에 Seeding한다고 했을 때 density가 5*10^4/ cells/well
Seeding 농도는 4 well기준 5*10^4/ml일 때
Seeding 농도/현재 cell 농도로 둘다 ml에서 ul로 변환해주면
5*10^7/ul / 5100 cell/ul이 된다고 하는데
1ml가 1000ul아닌가요?
저는 둘다 ul로 바꿔주면
5*10^7/ul / 510*10^7/ul인 것 같은데
혹시 계산 과정이나 방법에 오류가 있는지 질문드리고 싶습니다.
Cell Biology > Cell Culture
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A 답변 3
- 가지고 있는 cell 농도 : 5.1 x 10^6/ml, 510 x 10^4/ml
- seeding cell 농도 : 5 x 10^4/well
- well 당 넣을 cell 부피
: (5/510) x 1000 = 9.8ul
가지고 있는 cell 농도가 높으므로 희석해서 사용하는 것이 오차를 줄일 수
있습니다.
SPEED선생님 답변 정말 감사합니다.
혹시 제가 이해한 바로는 1 well당 9.8ul의 cell과 990.2ul의 medium 넣어주면 된다고 생각하는데
말씀하신 희석이 필요하다는 것이 제가 이해한 바가 맞는지 궁금합니다.
1ml를 넣을 경우 계산은 맞습니다.
그러나 9.8ul는 오차가 생길수 있는 양이기 때문에 원액을 최대한 희석한 후
media와 혼합 후 넣는 것이 좋습니다.
피펫팅 실력이 좋아서 9.8ul에도 오차가 생기지 않으면 상관없습니다.
9.8ul를 여러개 배양해서 cell 수를 측정해 보면 오차 정도를 알수 있습니다.
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