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Q IHC background 질문드립니다.

레벨01 아기새 (과기인)

20.08.28 14:56
조회3141

123123.png (다운로드 : 382)

IHC 실험하다가 background 떄문에 질문드립니다.

일반적인 protocol로 진행중이고,

blcoking, 1st antibody, 2nd antibody, ABC, DAB

매 step마다 1x PBS 5min 씩 2번 washing 을 하는데요.

Dehydration다하고 mounting 할때보면 사진에서 처럼

주변에 얼룩이 생김이나 잘 안보일수도있는데 연한 갈색으로요.

문제가 뭘까요..

전 실험실에서 진행할때는 문제없이 진행했엇거든요.

실험실 옮기고 차이라고 하면 ABC step추가 뿐인데.

IHC 고수님들 도움 요청드립니다.

Immunology > etc.

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A 답변 3

채택된 답변입니다.
레벨05 하이패쓰솔루션즈 (과기인)
24.06.05 10:13 (수정)

안녕하세요

비임상 조직병리판독 및 이미지분석기업 하이패쓰솔루션즈입니다.

1차 항체, 2차 항체 혹은 ABC complex가 도포한 곳에 약간 남아, DAB 도포시 발색 되는 것 으로 추측 됩니다. 다만 IHC 결과에 크게 영향을 주지는 않았을 것으로 판단됩니다.

그 외 어려움이 있으시면 아래의 메일로 연락 부탁 드리겠습니다.

imperialvet85@gmail.com

감사합니다.

답변리플

레벨01 아기새 (비회원)
20.08.28 16:23

감사합니다.

발색된 부위가 외곽이기도 하고 물방울(?) 최외곽 부분만

저렇게 background가 생긴거여서 결과엔 문제가 없을거라고

저도 생각하고 있긴한데요. 깔끔하게 염색이 되지 않은 거니까..

신경쓰여서 여쭈어 봤습니다.

혹시 해결 방법이 있을까요?

답변리플

채택된 답변입니다.
레벨05 하이패쓰솔루션즈 (과기인)
24.06.05 10:13 (수정)

안녕하세요

비임상 조직병리판독 및 이미지분석기업 하이패쓰솔루션즈입니다.

팝펜을 사용하셨으면 팝펜 자국 따라서 시약들이 묻어나온 것으로 보이는데 더 깨끗한 염색결과를 얻기 위해 1차 2차 abc complex를 좀더 희석해보시는게 어떨까 싶습니다만 저도 이에 대한 경험이 없어 확실치 않습니다.

그 외 어려움이 있으시면 아래의 메일로 연락 부탁 드리겠습니다.

imperialvet85@gmail.com

감사합니다.

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