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레벨6
착한사람
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2018.03.06 08:59
대학에서 보통 그람 양성균은 보통 황색포도상구균, 그람음성으론 대장균으로 실험 많이 합니다. 실험방법은 아래와 같습니다.
■ 그람염색의
원리
그람양성과 그람음성의 세포벽 차이로
인한 염색차이를 이용한 방법이다. 그람양성균의 세포벽은 여러 층의 펩티도글리칸(peptidoglycan)으로 구성되어 있으나 그람음성균은 한
층의 펩티도글리칸으로 구성되어 있다. 그람염색의 첫 단계인 crystal violet과 iodine 용액을 처리하면 서로 반응하여 불용성
복합체를 형성하게 된다. 그 뒤 탈색제인 alcohol을 처리하면 불용성 복합체가 용해되는데 그람양성균은 세포벽이 두껍기 때문에 내부에 침투해
있던 불용성 복합체들이 모두 빠져나가지 못한 채로 잔존하게 된다(보라색 염색). 하지만, 그람음성균은 얇은 세포벽으로 인해 탈색되어 사프라닌
용액에 의해 분홍색으로 염색되는 것이다.
1. 알코올로 주변
및 슬라이드글라스 세척
2. 슬라이드글라스
앞뒤를 구별하기 위해 테이프를 사용한다.
3. 슬라이드글라스에 증류수 1방울을 올려둔다.
4. 백금이를
화염멸균 한 뒤, 균을 뽑아 슬라이드 글라스
위에 도말한다.
5. 균을 고정하기
위해 슬라이드 글라스를 알코올 램프 위에서 건조시킨다.
6. 크리스탈
바이올렛으로 20초 동안 염색한다.
7. 흐르는
증류수로 세척한다 (2-3초).
8. 물기를
제거한다.
9. 요오드용액으로
60초 동안 염색한다.
10. 95% 알코올로
탈색시킨다.
11. 물기를
제거한다.
12 사프라닌
60초간 염색한다.
13. 흐르는
증류수로 세척한다 (2-3초).
14. 물기를
제거한다.
15. 커버글라스를
올리고 현미경을 관찰한다.
16. 그람양성: 자주색, 그람음성: 적색
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레벨6
Applied_Microbe
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2018.03.06 20:11
그람염색에서는 균주를 유리판에 열고정시키는 과정과 탈색시키는 과정이 정확히 이루어져야 결과가 정확하게 나와요
열고정 과정에서 균이 죽질 않으면 크리스탈바이올렛염색이 잘 안되요. 그리고 열고정을 너무 심하게 시킬 경우엔 전부 그람음성으로 나타나요
그리고 탈색을 너무 오래시킬 경우에는 전부 그람음성으로 보일 수가 있어요
방법은은 다 써져있고, 알코올램프 건조할때 너무 가까이 하지마세요..
