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westernblot 실험시 전기영동 관련 질문

레벨1 유쨩 ()

등록일 2016.09.05 13:47:03
조회2026

안녕하세요. 선배님들~

저는 지금 석사 2학기에 접어든 대학원생입니다.

westernblot 실험을 하면서 궁금한 점이 있어서 글을 올립니다.

westernblot을 위해서 겔을 만들고...전기영동 후....트랜스퍼 후....antibody를 붙이게 되는데

제가 궁금한 것은

전기영동 조건(시간, 전압, 전류 등)은 어떻게 하는 것이 좋은지?

입니다....

현재 제가 사용하는 겔 조성은 제가 이전에 배우던 실험실과 거의 비슷한데....
전기영동 조건이 너무나 달라서요;;;

현재 실험실에서는 겔1개당 0.02암페어를 걸어서 40-45분 러닝합니다(이전 실험실에서는 120 volt에서 70-80분 러닝했습니다)

겔 갯수에 따라서 러닝 조건을 다르게 하는게 맞는 것인지도 궁금하고.......
전압(볼트)가 아닌 전류(암페어) 단위로 맞추는게 맞는 것인지도 궁금합니다...

westernblot 고수님들의 도움 부탁드립니다ㅜㅜㅜㅜ

#westernblot
#웨스턴
#전기영동

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답변 1

답변등록

레벨5 Daegu*
2016.09.05 20:19

암페어 를 constant로 설정하는 경우 gel 1판당 암페를 설정해 주시는게 맞습니다.

그리고, volatage 를 constant로 설정하시는 경우 gel 갯수 상관 없이 동일 voltage로 내리시면 됩니다.

시간은 보통 dye가 빠지지 않을 정도 까지 내리시면 되구요,

저의 경우 voltage를 constant로 두어, stacking 80v에서 30분, separating gel은 50분에서 1시간정도 내려 줍니다.

그리고 전압과 전류 2가지중 어느것으로 맞추는 것은 중요하지 않습니다.
ohm's 법칙을 보면, V=IR 이기 때문입니다.

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