cell seeding 질문이요 | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q cell seeding 질문이요

안녕하세요(비회원)

15.09.14 17:28
조회4697

cell seeding 에 대해 궁금한 점이 있어서 글을 올립니다.

48well 에서 실험을 하는데

세포가 균일하게 well 에 분주되었는지를 확인하기 위해 MTT로 흡광도 측정을하면
(단순히 균일분주를 확인하기 위해서 MTT 측정을 하는 것이라 seeding 후 drug는 아무 처리도 하지 않습니다)

48well plate의 6~8well 들이 거의 흡광도가 낮게 나옵니다.
(well plate의 오른쪽 부분들은 a,b,c,d,e,f 상관없이 대체적으로 값이 낮다고 보시면 됩니다)

cell 카운팅은 hematocytometer를 이용해서 하구요.

처음엔 멀티를 이용하여 reservoir를 위아래로 잘 흔들어주며 멀티피펫으로는

피펫팅을 계속하면서 최대한 균일하게 분주하려고도 해보았고

50ml tube에 세포와 배지를 넣은 후 중간중간 흔들어주면서 각각 well에 seeding을
해봤습니다만

결과는 늘 저렇게 나왔습니다. 도대체 제 손은 무슨 손이길래 ㅠㅠ

* 질문이 이해가 되시려나 모르겠네요, 세포 실험중에 기본인 seeding에서 이렇게 막혀버리니

참 답답하네요...

#cell seeding

Cell Biology > etc.

등록순
추천순

A 답변 1

레벨08 안재진
15.09.14 18:08

cell seeding에 tip을 드리자면
1. tip은 한줄 처리시마디 교체를 하세요 - 두번째 세번째 조금씩 볼륨이 틀려지게 되어 있습니다.
2. tip은 low binding 팁을 추천드립니다.
3. tip은 wide tip을 이용하세요 입구가 일반적인 팁보다는 압력이 줄어 유리합니다.
4. 96well 기준 A열 1행 H열 12행 즉 제일 가세는 이용하지 마시고 PBS로 채워서 안쪽만 사용하세요 - 플레이트의 사이드 쪽부터 볼륨은 말라가게 되어 있습니다. 안쪽과 바깥쪽이 농도가 틀려질수 있습니다.
5. 파이펫을 보정을 받아 보세요

이정도를 한번 해보시고 무슨 손인지 판단은 나중에 해보세요