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sandwich elisa 질문입니다.

elisa (비회원)

등록일 2014.10.20 14:34:52
조회4726

elisa를 이용하여 실험을 처음하는 학생입니다.

sandwich 방법으로 capture ab - antigen - detection ab- secondary ab(HRP) 이렇게 하려고 하는데

capture 와 detection ab 를 동일 종에서 만들어진 ab면 sandwich에 사용할수 없는건가요?

실험 목적으로하는 단백질을 정제하여 mouse에 찔러 항체를 만들었고 이 항체를 이용하여 실험을 하였습니다.

실제 실험을 해보니 background 값이 엄청 나옵니다. ....

조건을 잡아야 하나요? 아니면 capture 와 detection ab 를 다른 예를들어 쥐와 토끼 에서 동일 항원으로 생산된 항체를 사용해야만 하나요?

이거 단백질 정제하는게 어려워 mouse 찌른 항원도 겨우 정제 하였는데..

잘 아시는분 계시면 답변 부탁드립니다.

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답변 3

답변등록

ATGC (비회원)
2014.10.21 13:38

capture 와 detection antibody가 동일 종에서 만들어졌다 하더라도

isotype이 다르면 가능하긴 할 것 같습니다.

어떤 실험을 하시는지 잘 모르지만

단지 항체가 잘 만들어졌는지 확인하는 실험이라면

반드시 sandwich elisa 방법을 사용할 필요는 없을 것 같습니다.

이끼 (비회원)
2014.10.21 16:25

conjugation하는 방법도 있습니다.
detection ab에 biotin을 붙여 avidin-HRP 를 이용한다던지..

레벨5 sean
2014.10.22 13:13

이끼님 말씀처럼 detection Ab는 biotinylation 하여 streptavidin과의 반응을 이용하는 게 나을 듯 합니다. streptavidin에 alkaline phosphatase나 HRP 같은 효소가 conjugation 된 걸 써야겠구요. Sandwich ELISA kit들 보면 거의 그렇게 되어 있더군요.

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