media에 있는 단백질 웨스턴 블롯방법은 어떻게되나요? | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q media에 있는 단백질 웨스턴 블롯방법은 어떻게되나요?

media(비회원)

14.07.22 11:50
조회2746

안녕하세요 실험을 아직 잘 모르는 석사 1학기차 학생입니다.

cell에 물질을 처리한후 분비된 단백질을 모아서 웨스턴 블롯을 하려고하는데

그 단백질을 모으는 방법을 잘 몰라서 질문을 했습니다.

저희 교수님 말씀으론 media의 물을 다 빼서 모으는 방법으로 하거나 필터로 분리하는 방법이 있다고 하시던데 이런경우엔 어떤 방법으로 단백질을 모아서 웨스턴을 해야할까요?

프로토콜이 있으시면 조금 자세하게 알려주시면 더 감사합니당.

Mol. Biol.-Protein > Western Blot

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A 답변 2

레벨08 강시
14.07.22 12:09

TCA ppt를 하시지요.

답변리플

레벨01 000 (비회원)
14.07.24 21:08

배지에 분비된 단백질 경우 농축시키지 않으면 Western blot으로 확인하기가 어려울 수 있습니다.

저 같은 경우 molecular-weight cutoffs (MWCOs) of 3K, 10K, 30K and 100K.짜리 spin column

중에 3K or 10 K spin column을 이용하여 Protein 농축하고 Lowry method로 Protein 정량후 Western blot하였습니다.

-배지를 모으신후 spin column에 배지를 넣고 centrifuge 돌립니다. 3Kda or 10 kda이하의 배지 성분은 아래로 빠지고 3kd or 10 kda이상의 Protein은 spin column 상부에 남게 됩니다. 10배이상 농축되는 것 같습니다.