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Q vector amplification

vector amp(비회원)

12.12.31 15:13
조회3732

안녕하세요! 질문이 있어서 이렇게 글을 씁니다

Novagen pET28 a-c vector를 주문하여 사용하기전에 이 벡터를 좀 불려놓으려합니다.
프로토컬을 찾아봤더니

벡터 1ug+ com cell 100ul 를 transfomation 과정(아이스 5분-42도 30초-아이스 2분- SOC 1ml 1시간 배양)을 거쳐 LB (+항생제) 플레이트에 스프레딩하여 콜로니를 LB에 접종하고,

plasmid DNA kit를 이용하여 뽑아 사용하면 된다고 했는데요.

이 프로토컬을 사용하여 벡터를 뽑는게 맞아요?

DNA를 뽑은 후에 엔자임 컷하여 전기영동을 걸었는데

투밴드가 떠서요 ㅠㅠㅠ
이 벡터의 사이즈에 맞게 밴드가 뜨긴 했는데 그 위로 밴드가 하나 더 있습니다 ㅠㅠㅠㅠ
혹이 이 밴드를 gel extraction 하여 써야되는 건가요?

#Vector

Mol. Biol.-DNA > Transformation

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A 답변 4

레벨05 genyx
12.12.31 15:36

Transformation 할 때 vector DNA를 1ug 사용하셨다는거 보니까 제한효소 처리할 때도 DNA를 엄청 많이 때려 넣으셨을 것 같은 생각이 드네요. 위에 뜬 밴드는 안 잘린 DNA 같아요. DNA양을 줄이시던지 제한효소 양을 늘려서 다시 반응시켜 보세요. 짤릴 겁니다. 아마도.

답변리플

레벨05 Calli
12.12.31 16:53

Gel 사진을 보면 좋겠는데 안잘린 밴드는 아래에 나오는게 정상이지 않을까요? 위에있는거면 Prep할때 Cell 상태가 안좋았다는걸로 여겨지네요. DNA Cut하고 왠만하면 젤 잘라서 extraction합니다. 프렙이 깔끔하고 실험하기 귀찮으면 mini prep kit으로 그냥 내려버려도 되긴하지만..