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qPCR 기계가 어느 방향에서 Fluorescein을 Detect하나요?

레벨1 qPCR ()

등록일 2012.09.26 07:20:34
조회5074

ABI7300으로 RT-qPCR을 많이 하는 대학원생입니다.
그 동안 선임자가 형광물질이 96 well plate의 밑에서 Detect된다고 해서 그렇게 알고 있었는데
얼마전 다른 동료 대학원생이 위에서 Detect한다고 해서 의문이 생겼습니다.
어느 방향에서 형광물질이 Detection되는 것인지 아시는 분 계신가요?
위에서 아래로 내려다보는 방향인지 아니면 옆에서 보는 방향인지 궁금합니다.
감사합니다.

#qPCR
#Fluorescein
#Detect

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답변 3

답변등록

레벨6 느림보
2012.09.26 09:37

회사마다 혹은 기종마다 검출메카니즘이 다를 수 있습니다. Abi는 위에서 쏘고 받습니다. 그러니까 투명한 실링 필름을 사용하는 것이지요. 같음 이유로 투명한 웰은 불리합니다. 가계바닥에서. 또는 다른 웰에서 올라오는 바탕 노이즈가 높기 때문입니다.

레벨2 rarity38
2012.09.26 19:57

장비별로 많은 차이가 있습니다만
로슈, ABI, BioRad 등 대다수의 장비가 위에서 검출하는 형태입니다.
그 외 중국 등 후발 주자의 경우 Tube의 측면 하단에서 검출하는 형태도 있습니다.
장비를 보면 쉽게 알 수 있는데, Block 윗쪽이 높다 싶은 것은 거의 위에서 검출하는 타입의 장비라고 보시면 됩니다.

레벨2 어니
2012.09.28 16:41

다른 분들이 잘 답변해 주셨는데 Optic module은 block type 의 qPCR 의 경우 plate 위에 있습니다. Light source 와 detector 다 위에 있는 것이지요.

Light source (ABI 7300 이면 halogen lamp) 에서 excitation 파장을 쏘면 반사경을 거처 well 에 들어갑니다. 여기서 well 에서 emision 파장이 나오면 이거 역시 반사경을 거쳐 detector (ABI7300 이면 CCD cemera) 로 가게 되는 것입니다.

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