Imunoprecipitation | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q Imunoprecipitation

레벨01 찬이

12.02.21 12:19
조회4303

제목 없음.png (다운로드 : 436)

안녕하세요 이제 대학원 1학년생으로 실험을 진행하고 있는데 결과가 잘 안나와서 조언좀
부탁드립니다.ㅠ.ㅠ
Ip를 진행 중에 있는데 결과가 자꾸 안나와서 미치겠습니다.
우선 vector 는 pEGFP-C2 에 유전자를 Cloning 해서 Transfection 후에 진행 하고 있습니다.
4 well confocal 은 마쳐서 Transfection 효율은 어느정돠 확인했는데
100 파이 plate 에서 IP trasnfection 후 RIPA 버퍼로 Cell lysis 후 (보통 6-10시간정도 진행합니다.) GFP Anti body 를 6시간정도 반응시키고 A/G agrose bead 6시간 반응후
Ripa 로 2회 washing . PBS 로 2회 washing 후 5X loading buffer 를 넣고 끓인후
SDS page 한 결과 입니다.
GFP 밴드가 나온다면 26Kda 정도에 동일하게 떠야 되는거 같은데 자꾸 45KDa 정도 위치에
동일한 Band가 나타나고 위아래로 잡 band 들이 나와서 .. 왜 이런지 도저히 모르겠습니다.
제가 뭐 잘못한다거나 빠트린게 있는게 아닌지 고수님들 도와주세요

Immunology > Immunoprecipitation

등록순
추천순

A 답변 1

레벨06 Jake
12.02.21 23:11

우선 vector 는 pEGFP-C2 에 유전자를 Cloning 해서 Transfection 후에 진행 하고 있습니다
-> Do you mean that protein X is fused with GFP such as GFP-X?

If so, IP by anti-GFP results in purification of GFP-X.
The MW of purified protein should be 26 + Y. Here, Y is the MW of protein X.