protein sampling이 잘 안되요.

레벨1 막내 ()

등록일 2011.08.25 16:55:43
조회2770

protein lysis를 진행시켰습니다.

먼저 cell harvest를 하고 바로 lysis buffer에 resuspension 해서
sonication까지 하고 4℃ 돌돌이에 O/N 했습니다.

다음날 아침에 와서 13000rpm에 20min centrifugation 하고
혹시 몰라 2차 centrifugation도 똑같은 방법으로 하였습니다.

전에도 블랏 결과가 끌려나온지라 sampling 문제라고 생각하여 깔끔히 하려고 했습니다.
근데 문제는 2차에서 pellet은 나오지 않았으나...
spin down으로 가라앉지 못하는 물질들이 튜브 벽면에 가라앉아 있었습니다.
아무래도 센트리에 샘플이 수직으로 세워들어가는 것이 아니라
기울어져 들어가는 것이라서 벽면에도 가라앉을 수 있는데...

soup만 잘 따지지가 않습니다... 그 벽면에 남는 잔해는 genomic DNA인가요?
아니면.. 그것이 무엇인지.........요...........

sampling을 깔끔하게 할 수 있는 방법 좀 알려주세요......ㅠ
몇 달동안 이 문제 해결하면 다른 문제 생기고.. 여러가지 문제로 고생하고 있습니다...ㅠㅠㅠ

고수님들~~~~~~~~~ 도와주세요ㅠ

#protein
#sampling
#gDNA

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