transformation시에 e.coli com cell을 제가 만들어서 쓰고 있습니다. 실험시에 필요한 strain이라서요. electroporation으로 하고 있는데 효율이 좋지않아 colony가 많이 뜨지 않는데 그냥 벡터를 transformation했을때는 효율이 좋은데 ligation한건 효율이 좋지 못하네요.
요새 납품받아쓰는 DH5a같은경우에는 얼음에 담갔다 42도 heat shock주고 얼음에 넣어 transformation을 하던데, 제가 만든 컴셀로 이런 방식으로 transformation할 수는 없는건가요? 궁금해서 여쭤봅니다.
님은 electroporation을 하고 계십니다. Molecular Cloning을 보세요. 아니면 여기 BRIC 실험에 찾아보면 chemical transformation 방법이 잘 설명되어 있습니다. Inoue 방법, Hanahan 방법 등이 많이 쓰입니다. 하지만 일반적으로 transformation 효율은 electroporation 방법이 훨씬 좋습니다. (http://bric.postech.ac.kr/myboard/list.php?Board=protocol&pkno=128)
그냥 vector를 comcell로 집어 넣을 때 electrophoration을 하고요, cloning 과정 중, ligation 후 하는게 heat shock 이더라고요... 다들 그렇게 하는 걸로 알아요. 두 transformation 방식이 다른데 두 방법은 같은 strain이라도 compcell 만드는 방법이 달라요. compcell을 어떤 방식 전용으로 만드느냐는... 님이 필요하신 만큼 만들어야겠죠.
