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Q westernbolt band문의입니다.

레벨03 토끼소녀

10.04.29 16:49
조회4542

westernblot 테러.hwp (다운로드 : 816)

안녕하세요~
westernbolt band문의입니다.
첨부파일에서 맨처음 있는 band가 NOS1인데요,,
다른 band에 비해 선명하게 나타나지 않습니다.

sample은 크림에 DMA를 섞어 mouse skin에 도포한 후 채취한 것입니다.
NOS2나 GAPDH는 첨부파일보다 더 잘나오는데요,,
NOS1은 지나간 흔적이 심하고 band가 선명하게 뜨지 않습니다.

조언 부탁드립니다. 감사합니다ㅠㅠ

Mol. Biol.-Protein > Western Blot

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A 답변 1

레벨08 엘피스
10.04.30 10:19

Band의 위쪽으로 끌리는 듯한 모양의 원인은 overloading에 의한 것이 가장 주된 것이며, 또한 sample내 오염된 gDNA나 기타 불순물에 의한 것이 일반적입니다. SDS-PAGE에서 흔히 간과하기 쉬운 가장 중요한 요소가 resolution과 separation입니다. Sample을 과도하게 넣어 protein전체가 끌리고 있다면 결과적으로 최종 data인 western band의 모양이 좋을 수 없습니다.

과도하게 sample을 걸더라도, 좀더 sample을 깨끗이 정제한 후 loading했다면 이와같은 끌림현상은 다소 완화시킬 수 있겠지만, 여전히 좁은 well에 너무 많은 단백질이 들어간다면 data의 개선은 기대하기 어렵습니다.