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SDS-Page Gel 을 만드는데 문제가 잇어서 고수님들의 팁을 좀 부탁드립니다.

레벨1 白夜魂 ()

등록일 2010.01.13 16:29:56
조회6256

이제 막 대학원생 생활을 시작하려는 학생입니다.

SDS-Page Gel을 학부 실험때 조교가 만들어준 Mix Solution으로만 만들어보고

2년동안 잊고 지내다가 지금 다시 만들어 보려하니

Separation Gel 마저도 잘 굳어지지 않아서 고수님들께 몇가지 팁을 좀 조언 듣고자 합니다.

10% 겔을 만들기위해 Molecular Clonning에서 나오는 Manual을 따라 조성을 만들었고

Standard이후에는 조성을 바꾸어 APS와 TEMED의 양을 늘려가면서 실험해 보았으나

굳지를 않습니다.

혹시나 이런 경험을 해보신 분이나 주변에서 지켜 보셨던 분들께서

100%알려주시지 않더라도 간단한 Tip이라도 부탁드립니다.

#Gel
#SDS-Page

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답변 4

답변등록

레벨6 개그
2010.01.13 16:47

젤이 굳지 않는다면 99.9% 정도 APS 와 TEMED 에 문제가 있다고 생각합니다.
결국 Gel 이란게 APS 와 TEMED 를 initiator, catalyst 로 이용한 polymerization 이니까요.

APS 는 10% 솔루션으로 만드셨겠죠? 0.1g 을 취해서 1mL 에 녹인 솔루션이겠지요. APS 는 최대한 fresh 한 걸 쓰시는게 좋습니다. 한번 용액을 만들고 상온에서 일주일이 넘어가면 젤이 굳는 속도가 눈에 띄게 차이가 나더군요. 4도에서 보관해도 2 주 이상되면 그냥 버리고 새로 만듭니다.
TEMED 의 양도 젤이 굳는 속도에 영향을 미칩니다. 보통 좀 급한경우는 MC 책에 나온 양의 1.5 배 정도 넣어줘도 좋더군요.

경험상..MC 책에 나온 조성대로 넣어주면 20분 내에 굳으리라 생각되고..잘 안굳는다면 APS 가 가장 의심되네요.

레벨6 juno
2010.01.14 00:54

APS를 fresh하게 새로 만드세요.
이게 99% 입니다.

레벨5 식스센스
2010.01.14 09:11

SDS-gel의 준비과정부터의 제조까지 full step을 밟아본 적이 없다는 말씀이군요.. ^^

APS를 새로 만드시고 혹시 TEMED가 문제가 생겼는지도 점검해보세요..
TEMED 고유의 냄새가 나지 않는다면 그놈이 맛이 간 것입니다. TEMED는 코를 쏘는 듯한 냄새가 납니다. 이런 냄새가 없다면 상태가 좋지 않다는 것을 의미합니다.

대부분은 APS의 문제입니다만 TEMED도 오래되서 맛이 가는 경우도 간혹 있으니 같이 점검해보시기 바랍니다.

실험을 처음 시작한다면 모든 것을 새로 만들어서 실험을 해보세요..
준비해야 하는 buffer도 많고 처음이라 시간도 많이 걸릴 수 있겠지만 장기적으로는 자신에게 도움이 되니 첫걸음이라면 전부 새로 만들어서 시도해보라고 하고 싶네요.. 그러면서 자료를 찾다보면 공부도 많이 됩니다.

白夜魂 (비회원)
2010.01.15 12:00

감사합니다^^

확인해 본 결과 APS 이상으로 학인돼었습니다

답변주신 분들께 감사드립니다

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