transformation 효율 비교 결과에 대해 질문이요! | 실험 Q&A > 커뮤니티

Q transformation 효율 비교 결과에 대해 질문이요!

레벨01 궁금..

09.08.05 09:30
조회9986

090805001.jpg (다운로드 : 1098)

며칠전 TA vector를 이용하여 transformation을 했을 때 colony가 거의 뜨지 않아..
조언을 얻어 효율비교 실험을 하게 되었습니다..

기존에 저희가 만들어 쓰는 c.cell과 다른 실험실에서 TA vector(어디 제품인지는 모르겠습니다) 이용해서도 잘 된다 했던 c.cell 만드는 protocol을 얻어 만들어 했는데.. 큰 차이가 없었습니다.

하여 저희 실험실에서 사용한 c.cell을 가지고 TA vector를 transformation한 것..
pBluestript vector를 transformation한 사진을 올립니다..
첨부된 사진에서 위의 사진이 TA vector를 ON self-ligation한 후 transformation한 것..
아래 사진이 pBluestript vector를 transformation한 것입니다.
vector 양은 정량해서 동량을 넣었습니다..

이 사진을 보며.. 제가 구입한 TA vector가 transformation 효율이 정말 낮구나..
c.cell 을 같이 판매하던데 살까...로 생각할 수 있는 결과인지 궁금합니다.
직접 세어보았을 때.. TA vector는 clonly가 60~70개 정도 떴습니다.
아주 간간히 이유는 모르겠지만 white colony가 7개 정도 보이고요..

아니면 이 외에도 따로 ligation 문제도 고려해야 할런지요..
조언 부탁드립니다..^^

Plant Biology > Transformation

등록순
추천순

A 답변 1

레벨05 미맹
09.08.05 10:43

pBluestript를 형질전환 시켰을 때는 콜로니가 많이 나왔습니다.
그러니 com. cell의 효율은 괜찮은 것 같습니다.
이론상 T-vector는 self ligation이 될 수 없습니다. 그러나 실제로 실험을 하면 self ligation이 일어나죠...

아마튼 transformation 했을 때 거의 colony자체가 뜨지 않았다면 ligation mixture에 ligase 저해물질이 포함된 것으로 보입니다.

insert인 PCR product를 깨끗이 정제하시고 ligation mixture에 insert의 볼륨 rate이 너무 높지 않도록 하시구요..

그럼 행운을 빕니다.