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western에서 조직을 sampling 하려는데요..

레벨1 실신 ()

등록일 2009.07.28 20:58:34
조회3118

저희 실험실에 western이 setting이 되어있지 않아서 지금 잡고 있는데요...
뇌 조직을 가지고 하려고 하는데..
sampling을 하고서 centrifuge에 돌리면 밑에 가라앉는게 너무 심해서요..
예를들어 total 60ul를 했다면 가라앉아서 쓸 수 있는 양이 약 30ul정도 밖에 되지를 않아서요..
cell 같은 경우에는 lysis buffer를 넣어서 두 번정도 centrifuge를 돌려서 상층액을 따서 이용하기에 가라앉는게 그렇게 많지않았는데 조직같은 경우는 갈고 난 다음에 그것을 그냥 사용하는데요..
조직도 cell처럼 하는 방법이 없을까요??ㅜ.ㅜ
뇌 조직을 이용해 western 하시는 선생님 계시다면...sampling하는 법 좀 알려주세요..ㅠ.ㅠ

#western
#brain
#sampling

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답변 2

답변등록

레벨5 rnl
2009.07.29 11:28

제가 했던 방법은 뇌나 다른 조직 전체 prep해서 사용한 경우인데..
각각 조직의 무게를 측정해서 그 무게의 동량의 lysis buffer를 넣고
homogenizer로 갈아버렸습니다.(1.5ml tube에서 할때는 500ul이상이 넘으면 갈다가 넘쳐버릴 수 있음) 그리고 centrifuge 돌려서 상층액만 따로 옮기고
거기서 일부만 다시 떠서 western을 하였습니다.
뇌같은 경우는 갈때 bubble이 상당히 심해서 약간의 주의가 필요하더군요.
갈리긴 금방 갈립니다.
lysis buffer는 논문 검색하심 조성은 금방 나오실 것 같네요.

레벨6 juno
2009.07.29 19:21

조직을 갈아서 실험을 할때 주의하실 점중의 하나는 충분한 buffer의 사용입니다.
갈때 무슨 buffer를 어떻게 넣는지 내용이 없으니 정확히 말씀드리기는 어렵군요.
일반적으로 많이쓰는 sucrose EDTA Tris 의 경우 weight per volume을 1:10 정도는 해 주시는게 좋습니다.

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