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레벨5
겨우살이
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2009.07.19 13:24
흡광도 값 자체에 문제가 있는 것은 아닙니다.
세포수에 비례하여 흡광도가 비례하여 증가하는 경우는 문제가 없지요.
문제는 세포수가 너무 많으면 흡광도가 비례하여 증가하지 않을 수 있기 때문입니다.
실험 조건을 잡아서 적정 흡광도 범위 (즉 세포수)를 설정하는 것이 좋지만
보통은 흡광도가 매우 높은 때 적정한 실험조건을 벗어나는 경우가 많기 때문에
흡광도가 높지 않게 실험을 하는 것입니다.
MTT assay시 흡광도 OD값은 너무 높지 않아야 합니다.
OD값이 1이상이 되면 그 실험결과는 신뢰하기 어렵습니다.
흡광도 값이 1 이상이 된다는것은 그 자체의 농도가 너무 높다는 것입니다.
그 정도 높은 값에서의 흡광도값 차이는 농도를 제대로 반영한다고 보기 어렵습니다.
MTT assay에서 control 흡광도 값은 0.7~0.8정도의 값이 적당합니다.
처음 실험계획을 잡으실때, 예비실험을 통해 적정한 흡광도 범위가 나오는 세포수를 설정하셔서 실험을 하시는 것이 좋습니다.
혹시 적정 흡광도값을 내기위한 세포수가 너무 적어 실험이 불가능한 조건이 되는것이라면..
최종 단계에서 control을 포함한 대조군들을 모두 같은 농도로 dilution하여 적정한 흡광도 범위가 되도록 하신후에 그 값을 비교하셔야.. 그 값을 신뢰할수가 있습니다.
보통, 흡광도가 너무 높으면 높은 값에서의 차이가 농도를 제대로 반영한다고 보기어려워 조건을 벗어나게 됩니다.
적정흡광도값이 되도록 세포수를 재 설정하거나.. 적정 농도로 dilution 하세요~
- 이상 MTT assay만 3년 넘게 실험중인 연구원이었습니다.--;;)
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레벨3
초보실험꾼
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2009.07.20 04:15
alamar blue의 적정 O.D값은??? ㅡ.,ㅡ;;;
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레벨5
어려운뤼사취
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2009.07.20 09:06
초보 실험꾼 님...
얼마전 알라마 뭐시기 취급 회사로부터 샘플을 받고...
현재 내와있는 MTT, CCK-8, 알라마...비교해본적 있는데요...
알라마도 MTT 와 OD값 비슷하게 나와야 합니다.
CCK-8 은 4까지 올라갑니다.
