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competitive ELISA 실험시 궁금증..

ELISA (비회원)

등록일 2009.07.15 14:22:03
조회8294

competitive ELISA 실험을 시작하려고 하는데 궁금한 사항이 몇가지 있어서 질문드립니다.

1. 랩에서 ELISA를 처음해서 마땅한 프로토콜이 없어서 여기Q&A를 보면서 숙지하고있습니다.
보통 항원처리, blocking, 1차항체, 2차항체 처리는 몇시간을 하시는지 알고 싶습니다.
항원처리를 12hr 한다는데도 있고 2 hr 한다는데도 있어서 고민입니다.

2. negative control 과 positive control이 무엇인지, 어떤 조건으로 잡는것인지 궁금합니다.ㅠ

알려주세요~~~~~~~~ㅠㅠㅠㅠ

#competitive ELISA

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답변 2

답변등록

레벨5 rnl
2009.07.15 15:12

우선 competitive ELISA의 경우게 항원이 well에 coating되어 있는 경우와 항체가 coating되어 있는 경우가 있습니다. 그래도 비슷하겠지만
제가 요즘 쓰는 ELISA protocol은
blank
standard
sample 이렇게 하는데
standard는 농도별로 0부터 1250pg/ml 등.. 측정하실 샘플에 따라 다르실듯.

1.well에 50ul씩 well에 sample과 standard를 넣어주고
blank는 100ul dilution solution(standard만들때 쓰는 buffer)를 넣습니다.
2.항체를 50ul씩 blank를 제외한 나머지에 다 넣어주고
3.antibody-congugate를 50ul 습니다.(역시나 blank는 제외)
4.shaking RT 3hr rpm은 500rpm
5.aspiration and wash 4회 400ul정도씩
6.substrate solution (제가쓴게 HRP이 붙어 있어서 일종의 western에 luminol과 enhancer가 들어간ECL과 비슷한 buffer입니다) 200ul넣고 RT에서 30분
7.stop solution 50ul
8. 30분 이내 측정.

참고하세요. 더 궁금하심 구글이나 bric에 정리되어 있는게 있을듯.
아니면 프로메가나 R&D 회사등 회사에서 쓰는 protocol을 보셔도 될듯

ELISA (비회원)
2009.07.15 15:14

감사합니다^^

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