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Western용 protein loading sample 만들 때, cooking time

레벨1 병아리

등록일 2009.07.04 16:04:38
조회6445

Western 하기 전,
BCA 정량 후 측정된 결과값으로,
25ug loading sample을 만드려고 합니다.
(protein + D.W + dye) mix해서, 5분간 cooking 후 사용한다고 알고 있습니다.
그런데, 혹시...
이 시간을 15분 정도로 오래 방치했다면, western 결과에 영향을 주나요?
sample 다시 만들어야 할까요?? ㅡ.ㅜ

참고로,
breast cancer cell에서 뽑은 단백질입니다.

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답변 3

답변등록

레벨5 하늘을달려라
2009.07.05 01:53

문제가 없을것 같습니다...

너무 걱정하지 마시고 그냥 진행해 보세요...

좋은결과 얻으실꺼에요...

저같은경우는 western용은 15분간 끓이고 하지는 않지만....

bead같은것들을 끓일때는 쪼금 오래하기도 합니다 ..10분씩 ㅎㅎ

1-2시간 끓였다며는야 문제가 될수도 있겠지만...15분은 뭐..괜찬을겁니다

레벨5 홍주호
2009.07.05 09:22

15분 방치는 괜찮습니다~

dye라는게 laemmli sample buffer를 말씀하시는 건가요?

laemmli sample buffer에는 salt가 없기 때문에 샘플을 희석하실 때에는

lysis buffer나 PBS 등으로 해주세요~

레벨1 병아리
2009.07.06 17:25

답변,
정말정말 감사합니다. ^^

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